Протеин, витамины и минералы (Protein) «ОРИХИРО»
О товаре
Характеристики продукта
Кому рекомендован БАД
Описание
224
Популярен среди спортсменов и атлетов Японии.
Рекомендован тем, кто соблюдает диету.
Подробности
5 преимуществ Протеина Орихиро- идеальное средство для получения быстрой энергии после тренировки, работы или напряженного дня;
- подходит для всех возрастов и полов, позволяя восстанавливать запасы белка, витаминов и аминокислот в организме;
- форма приема удобна – просто нужно смешать с водой или молоком, чтобы получить протеиновый коктейль;
- за счет легкого и быстрого использования это идеальный способ для усвоения полезных веществ.
Если вы имеете проблемы с сердечно-сосудистой, пищеварительной и нервной системами, то мы рекомендуем приобрести Протеин, добавленный витаминами. Это поможет вам в восстановлении жизненного цикла и устойчивости здоровья.
Как легко сделать и принимать протеин коктейль Готовьте и употребляйте быстро, дабы избежать осадочной реакции.Для получения максимальных выгод от БАД Протеин примите его после спортивной тренировки, вместо перекуса или ужина, а также в произвольное время дня. Вскройте упаковку протеина, залейте стакан воды или молока, добавьте 2 ст.л. порошка и перемешайте.
БАД Протеин сумеет порадовать Вас ненавязчивым привкусом и вкусом, которые мало чувствуются при приеме пищи с молоком. Не делайте завтрак заранее или продолжительное время до приема — пить следует быстро, так как иначе порошок может раствориться.
Показать полностью
Характеристики продукта
| Форма выпуска | Порошок 360г |
| Употребление | возьмите около 20 граммов (две столовые ложки) данного продукта и растворите в воде или молоке. |
| Содержание | |
| Состав | соевый протеин, доломит (содержит CA, Mg), лецитин сои, фосфат кальция, железная соль лимонной кислоты, витамин C, ниацин, витамин Е, пантотенат кальция, витамины B2, B1, B6, A, фолиевая кислота, витамины D, B12 |
| Возрастное ограничение | 18+ |
| Противопоказания | индивидуальная непереносимость, беременность и лактация |
| Способ хранения | хранить в сухом, защищённом от солнечного света и влаги месте |
| Страна производства | Япония |
| Производитель | Орихиро / ORIHIRO Co. Ltd. |
Рекомендуется принимать за 1 раз 20 г, во время спортивных упражнений или еды. Принимайте, запивая водой или молоком. При потреблении во время еды повышается питательная ценность и появляется новый вкус. Дневная норма белка — 70 г. Распределите её между приёмами пищиКому рекомендован БАД
- Людям с активным жизненным стилем, трудолюбивым работникам, путешественникам, любителям экстремальных видов спорта, атлетам, увеличивающим физическую и умственную нагрузку;
- тем, кто проходит процесс снижения лишнего веса и соблюдает диеты;
- людям, имеющим профилактические цели улучшения метаболизма;
- пациентам, принимающим лечебные препараты, мы предлагаем продукты, содержащие необходимую дозу полезных и нужных питательных веществ, которые помогут поддержать длительное хорошее самочувствие и предотвратят заболевания.
Частые вопросы
Я очень сильно устаю на работе, мне кажется, что у меня синдром хронической усталости, не могу восстановить силы.
Могут ли препараты «Орихиро» помочь мне?
Да, компания «Орихиро» может предложить большой выбор препаратов, снимающих усталость и восстанавливающих силы. Например:
- Элеутерококк (Сибирский жень-шень)
- Фукоидан
- Коэнзим Q10 с витаминами
У меня серьезные проблемы с кожей, крема и косметика не помогают. Если какой-нибудь препарат, способный помочь мне?
Да, в серию «Орихиро» входит сразу несколько препаратов, разработанных специально для восстановления здоровья кожи, восстановления ее тонуса и возвращения молодости. Например:
- Коллаген + гиалуроновая кислота
- Коллаген со вкусом персика
- Коэнзим Q10 с витаминами
Все ли БАД на сайте прошли сертификацию?
Да, все препараты Орихиро, которые мы предлагаем, прошли сертификацию. Она является гарантией того, что продукция безопасна, соответствует всем современным требованиям качества. Сертификаты вы можете посмотреть в этом разделе сайта.
Все вопросы и ответыСкидки при покупке на сайте
3-х продуктов
Скидка 5%
4-х продуктов
Скидка 10%
5 и более продуктов
Скидка 15%
ЛУЧШЕЕ ВИДЕО ПРО ПРОТЕИН! ВРЕД И ПОЛЬЗА ПРОТЕИНА.
КАК ПРИНИМАТЬ ПРОТЕИН. КАКОЙ ПРОТЕИН ВЫБРАТЬ 12+1 год и 2 месяца назад
Влад Литвиненко103 подписчика
💪 Получите для себя ГРАМОТНУЮ ПРОГРАММУ ТРЕНИРОВОК — https://vladlitvinenko.com
✅ Программа подбирается в соответствии с данными вашего тела
✅ Учитывается ваш возраст, дневная активность и опыт тренировок
✅ Программа постепенно усложняется по мере роста вашей тренированности и приобретается один раз. Никаких ежемесячных платежей
✅ Вы научитесь правильно выполнять каждое упражнение тренировочного плана, избегая ошибок и травм
✅ Если у вас возникают вопросы по ходу занятий — вы всегда получаете ответы лично от меня
Влад Литвиненко
● Дипломированный тренер
● Сертифицированный участник конвенций Nike и Reebok
● Тренер команды Adidas к международным соревнованиям Adidas Creators Games на протяжении 3 сезонов
● Автор 300+ информационных видео и статей о тренировках
● Эктоморф, который натурально набрал 25 кг мышечной массы (с 59 кг до 84 кг) с процентом жира 9.3
● Опыт персональных и групповых тренировок с клиентами — более 10 лет
Если у вас появился вопрос — напишите мне:
Почта: creator.
Вторая ситуация – это НАБОР МАССЫ. ЗДЕСЬ протеин – это и строительный материал для мышц, и дополнительные калории, которые легко выпить.
Но вы можете сказать: «Влад, подожди. Я и без этого протеина набирал. Хочу обойтись обычной едой. Это реально?»
МОЖНО ЛИ ОБОЙТИСЬ БЕЗ ПРОТЕИНА?
Ответ – да.
Вы можете ПОЛНОЦЕННО питаться только ТВЁРДОЙ едой и не пить протеин вообще.
Грубо говоря, его имеет смысл использовать именно тогда, когда вы не добираете белок.
Но как это понять?
НУЖЕН ЛИ ПРОТЕИН ИМЕННО МНЕ?
Скорее всего вы не будете считать каждый грамм протеина и взвешивать каждую порцию еды. Поэтому, говоря ПРОСТЫМ ЯЗЫКОМ, если вы едите примерно 5 раз в день и в КАЖДОМ приёме пищи у вас есть кусок мяса или рыбы, может быть несколько яиц или молочные продукты, то дополнительный протеин вам НЕ НУЖЕН.
Но если так получается, что за весь день вы только раз съедаете что-то мясное или выпиваете стакан МОЛОКА, то за дополнительный протеиновый коктейль мышцы вам однозначно скажут «Спасибо!».
А если вы хотите на 100% быть уверенными в том, что получаете ДОСТАТОЧНОЕ количество белка, и не хотите ничего ВЫСЧИТЫВАТЬ, то вы можете получить уже ГОТОВЫЙ и ПРОСЧИТАННЫЙ план питания для СЕБЯ под этим видео.
Пищевой белок и хроническая болезнь почек – продукты, содержащие белок и фосфор
Без белка наш организм не смог бы исцелиться от травм, остановить кровотечение или бороться с инфекцией. Вот почему употребление белка так важно для поддержания здоровья. В среднем человеку требуется от 40 до 65 граммов белка в день.
Однако людям с хронической болезнью почек (ХБП) белок может быть опасен. Хотя белок является необходимым питательным веществом, пациенты часто сталкиваются с дилеммой ограничения потребления белка.
Белок и пациент с ХБП
При приеме белка образуются белковые отходы. Здоровые почки имеют миллионы нефронов, которые фильтруют эти отходы. Затем он выводится из организма с мочой.
Нездоровые почки теряют способность удалять белковые отходы, и они начинают накапливаться в крови. Потребление белка с пищей для пациентов с ХБП зависит от стадии заболевания почек, статуса питания и массы тела. Консультации с зарегистрированным диетологом рекомендуются для планирования и контроля диеты с низким или высоким содержанием белка.
Белок и стадии ХБП
Пять стадий ХБП определяются скоростью клубочковой фильтрации (СКФ), показателем того, насколько хорошо функционируют ваши почки.
На первой стадии ХБП СКФ составляет 90 или выше, что является нормальным. Однако в моче обнаруживаются аномальные уровни белка. На стадии 2 СКФ составляет 60-89. В 3 стадии СКФ до 30-59. На стадии 4 СКФ резко снижается до 15-29.
Стадия 5, последняя стадия заболевания почек, известная как терминальная стадия почечной недостаточности или ТХПН, возникает, когда СКФ падает ниже 15 и почки практически не функционируют.
Хотя стадия 4 указывает на серьезное снижение функции почек, вы все равно можете жить без диализа.
Поскольку нет лекарства от болезни почек, основное внимание уделяется сохранению вашего питания и уменьшению накопления белковых отходов. Избыток белковых отходов может вызвать тошноту, потерю аппетита, рвоту, слабость, изменение вкуса и зуд.
Если вы находитесь на стадии 1, 2 или 3, потребление белка может быть ограничено 12–15 процентами ежедневного потребления калорий. Это тот же уровень, который рекомендован Диетическими эталонными нормами потребления (DRI) для здорового питания для нормальных взрослых. Если у вас 4-я стадия ХБП, ваш диетолог может посоветовать вам снизить потребление белка до 10 процентов от ежедневного потребления калорий.
Белок и терминальная почечная недостаточность
Для пациентов на стадии 5, у которых почки работают менее чем на 10 процентов, необходим диализ, чтобы заменить отказавшие почки или до тех пор, пока не станет возможной трансплантация почки.
Диализ удаляет белковые отходы из крови, и диета с низким содержанием белка больше не нужна.
К сожалению, некоторые аминокислоты удаляются во время диализа. Для замены потерянного белка требуется более высокое потребление белка.
Диабет, ХБП и белок
Если у вас развилась ХБП в результате диабета, диетолог и врач помогут вам справиться с диабетом. Хороший контроль уровня глюкозы и артериального давления может помочь замедлить прогрессирование заболевания почек у людей с диабетом. Ваш диетолог определит необходимый уровень ограничения белка.
Одни белки лучше других?
Продукты с высоким содержанием белка, такие как мясо, молоко и яйца, могут содержать много жира и холестерина. Если у вас высокий уровень холестерина или сердечно-сосудистые заболевания, ваш врач и диетолог могут порекомендовать вам есть больше полезных для сердца белков. Хороший выбор включает рыбу, куриную грудку и нежирные соевые продукты, а также нежирные молочные продукты.
Фосфор — это минерал, который накапливается в крови по мере прогрессирования почечной недостаточности.
Вам может быть рекомендовано уменьшить количество продуктов с высоким содержанием белка, содержащих большое количество фосфора, если ваш уровень превысит норму. Молоко, йогурт, сыр, сушеные бобы и горох, орехи и семечки, арахисовое масло и некоторые соевые продукты богаты белком и фосфором.
Как осуществляется управление белками?
Чтобы убедиться, что вы получаете необходимое количество белка для вашего состояния, сначала поговорите со своим нефрологом-диетологом, чтобы получить конкретные рекомендации относительно потребления белка. Это число будет зависеть от стадии ХБП, результатов лабораторных исследований, размера тела и других состояний здоровья.
Если вам назначена диета с низким содержанием белка, ваши порции продуктов, содержащих белок, будут меньше, чем обычно. Для человека среднего размера мясо, птица или рыба ограничены примерно 4-6 унциями в день.
Если мне нельзя есть белок, что мне можно?
Хотя ваш рацион может быть ограничен продуктами с высоким содержанием белка, вы все равно будете есть разнообразные продукты, такие как яйца, молоко, мясо, птица, рыба, фрукты, овощи и злаки.
Употребление достаточного количества калорий важно для предотвращения разрушения мышц и потери веса. Вам могут посоветовать есть больше полезных жиров, таких как оливковое масло, или принимать добавки, которые помогут вам получать достаточно калорий.
В зависимости от вашего состояния вам также может потребоваться ограничение натрия, калия или фосфора. Это определяется вашим кровяным давлением и вашими лабораторными показателями. Ваш почечный диетолог проведет вас обучение.
Обзор методов анализа белков | Thermo Fisher Scientific
Количественное определение концентрации белка является неотъемлемой частью любого лабораторного рабочего процесса, включающего выделение, очистку, маркировку или анализ белка. Тесты Pierce Protein Assays предоставляют широкий спектр возможностей для точного определения концентрации белка на основе времени анализа, чувствительности, совместимости, линейности стандартной кривой и вариаций между белками. Хотя в этой статье в качестве примеров используются продукты для анализа белков Pierce, обсуждаемые принципы и химические процессы в целом применимы к большинству доступных колориметрических или флуорометрических методов анализа белков.
Explore BCA Assay Kits Explore Bradford Assay Kits Техническое руководство по анализу белков
Содержание страницы
- Введение. -белковая вариация анализов белков
- Расчеты и анализ данных
- Количественный анализ пептидов
Введение
Количественное определение белка часто необходимо перед обработкой образцов белка для выделения, разделения и анализа с помощью хроматографических, электрофоретических и иммунохимических методов. В зависимости от требуемой точности, количества и чистоты доступного белка для определения концентрации белка подходят разные методы.
Самый простой и прямой метод определения концентрации белка в растворе заключается в измерении поглощения при 280 нм (УФ-диапазон). Аминокислоты, содержащие ароматические боковые цепи (например, тирозин, триптофан и фенилаланин), сильно поглощают УФ-излучение. Белки и пептиды поглощают УФ-свет пропорционально содержанию в них ароматических аминокислот и общей концентрации.
Другой метод, традиционно используемый при анализе аминокислот с помощью ВЭЖХ, заключается в мечении всех первичных аминов (т. е. N-конца и боковой цепи остатков лизина) окрашенным или флуоресцентным красителем, таким как нингидрин или о-фталевый альдегид (OPA). Подходы с прямым поглощением УФ-света и реагентом ВЭЖХ имеют определенные недостатки, которые делают эти методы непрактичными для использования с типичными образцами белка в рабочих процессах протеомики. Метод УФ-абсорбции не идеален для белковых смесей, так как разные белки имеют различное содержание ароматических аминокислот, что меняет характеристики поглощения. Кроме того, любое небелковое содержимое, поглощающее ультрафиолетовый свет, будет мешать измерениям.
Чтобы преодолеть эти недостатки, было разработано несколько колориметрических и флуоресцентных методов анализа белков на основе реагентов, которые используются почти во всех лабораториях, занимающихся исследованиями белков. Образцы белка добавляются к реагенту, вызывая изменение цвета или усиление флуоресценции пропорционально добавленному количеству.
Концентрацию белка определяют по стандартной кривой, состоящей из известных концентраций очищенного эталонного белка. Эти методы анализа белка можно разделить на две группы в зависимости от типа используемой химии.
Таблица 1. Типы, преимущества, недостатки и примеры методов анализа белка.
| Метод | Преимущества | Недостатки | Реагенты для примера |
|---|---|---|---|
| УФ-поглощение |
| ||
| Биуретовые методы: Белково-медное хелатирование и вторичное обнаружение восстановленной меди |
|
| BCA Assays Lowry Assays |
| Колориметрические методы на основе красителей: Связывание белка с красителем и прямое обнаружение изменения цвета |
|
| Bradford (Coomassie) |
| Методы флуоресцентного красителя: Связывание белка с красителем и прямое обнаружение увеличения флуоресценции, связанного со связанным красителем |
|
| Флуоресцентный анализ EZQ Анализ белков Qubit |
Выбор анализа белка
Ни один реагент не может считаться идеальным или лучшим методом анализа белка.
Каждый метод имеет свои преимущества и недостатки. Выбор среди доступных анализов белка обычно основывается на совместимости метода анализа белка с образцами. Кроме того, необходимо учитывать потенциальные мешающие вещества, включенные в образцы, которые могут повлиять на определенные методы анализа, а также на точность, воспроизводимость и требуемое время инкубации. Таким образом, успешное использование белковых анализов включает в себя выбор метода, наиболее совместимого с анализируемыми образцами, выбор соответствующего стандарта анализа, а также понимание и контроль конкретных остающихся допущений и ограничений.
Цель состоит в том, чтобы выбрать метод, который требует наименьших манипуляций или предварительной обработки образцов для включения веществ, мешающих анализу. Каждый метод имеет свои определенные преимущества и недостатки. Поскольку ни один реагент не может считаться идеальным или лучшим методом анализа белка для всех обстоятельств, большинство исследователей имеют более одного типа анализа белка, доступного в их лабораториях.
Важные критерии выбора теста включают:
- Совместимость с типом образца и компонентами
- Диапазон анализа и требуемый объем образца
- Однородность между белками (см. ниже)
- Скорость и удобство для количества тестируемых образцов
- Необходимо наличие спектрофотометра или планшет-ридера для измерения окрашивания (абсорбции) в результате анализа
Некоторыми распространенными веществами, которые потенциально могут мешать методам анализа белков, являются восстановители (например, DTT) и детергенты (например, Triton X-100). Как правило, образцы, содержащие восстановители или хелатообразователи меди, предпочтительно анализируют с помощью анализов на основе красителя Кумасси (метод Бредфорда). Это связано с тем, что анализы на основе красителя Кумасси, такие как анализы Пирса Кумасси (Брэдфорд) и Пирса Кумасси Плюс (Брэдфорд), совместимы с восстановителями и не требуют реакций связывания меди с белком. Для тех образцов, которые содержат детергенты, анализы белка на основе меди, такие как анализ Pierce Rapid Gold BCA, являются лучшим выбором, поскольку они не ингибируются низкими или умеренными количествами детергента.
Помимо совместимости образцов, анализы белков также обычно группируются по диапазону концентраций белка, которые они могут обнаружить. Для образцов, в которых ожидается низкая концентрация белка (<20 мкг/мл), может потребоваться использование альтернативного протокола анализа для микропланшетов или специализированного анализа, такого как анализ белка Pierce Micro BCA, который специально разработан для разбавлять образцы. Если общая концентрация белка в образцах высока (> 2000 мкг/мл), часто можно использовать разбавление образца для преодоления любых проблем с известными мешающими веществами. Иногда образец содержит вещества, которые делают его несовместимым ни с одним из методов анализа белка. Предпочтительным методом борьбы с этими типами мешающих веществ является их простое удаление.
Тесты Pierce Rapid Gold BCA Protein Assay и Coomassie (Bradford) Protein Assay дополняют друг друга и обеспечивают два основных метода для размещения большинства образцов. Различные вспомогательные реагенты и альтернативные версии этих двух анализов удовлетворяют многие другие потребности в конкретных образцах.
- Загрузить: Таблица совместимости анализов белков
- Изучить: Руководство по выбору анализов белков
Выбор стандарта белка
Поскольку белки различаются по своему аминокислотному составу, каждый из них по-разному реагирует на каждый тип белкового анализа. Таким образом, лучшим выбором в качестве эталонного стандарта является очищенная известная концентрация белка, наиболее распространенного в образцах. Этого обычно невозможно достичь, и это редко удобно или необходимо. Во многих случаях цель состоит в том, чтобы просто оценить концентрацию общего белка, и допустима небольшая вариабельность между белками.
Если высокоочищенная версия интересующего белка недоступна или слишком дорога для использования в качестве стандарта, альтернативой является выбор белка, который будет давать очень похожую кривую цветового отклика в выбранном методе анализа белка и доступны для любой лаборатории в любое время. Как правило, бычий сывороточный альбумин (БСА) хорошо подходит для стандарта белка, поскольку он широко доступен в высокой степени чистоты и относительно недорог.
В качестве альтернативы, бычий гамма-глобулин (BGG) является хорошим стандартом при определении концентрации антител, поскольку BGG дает кривую цветового отклика, которая очень похожа на кривую иммуноглобулина G (IgG).
Для наибольшей точности оценки концентрации общего белка в неизвестных образцах важно включать стандартную кривую каждый раз при проведении анализа. Это особенно верно для методов анализа белка, которые дают нелинейные стандартные кривые. Решение о количестве стандартов и повторов, используемых для определения стандартной кривой, зависит от степени нелинейности стандартной кривой и требуемой степени точности. Как правило, для построения стандартной кривой требуется меньше точек, если цветовая характеристика является линейной. Как правило, стандартные кривые строятся с использованием не менее двух повторов для каждой точки на кривой.
- Узнайте больше: Анализ данных анализа белков
- Узнайте: Стандарты анализа белков
Подготовка проб для анализа белков
Перед анализом образца на содержание общего белка его необходимо солюбилизировать, обычно в забуференном водном растворе..jpg)
Часто принимаются дополнительные меры предосторожности, чтобы подавить рост микробов или избежать случайного загрязнения образца посторонними частицами, такими как пыль, волосы, кожа или кожный жир.
В зависимости от исходного материала, применяемого перед проведением анализа на белок, образец будет содержать различные небелковые компоненты. Осведомленность об этих компонентах имеет решающее значение для выбора подходящего метода анализа и оценки причины аномальных результатов. Например, ткани и клетки обычно лизируют буферами, содержащими поверхностно-активные вещества (детергенты), биоциды (антимикробные агенты) и ингибиторы протеаз. Также могут быть включены различные соли, денатуранты, восстановители и хаотропы. После фильтрации или центрифугирования для удаления клеточного дебриса типичные образцы по-прежнему будут содержать нуклеиновые кислоты, липиды и другие небелковые соединения.
На каждый тип анализа белка отрицательно влияют вещества того или иного рода. Компоненты раствора белка считаются мешающими веществами в анализе белка, если они искусственно подавляют ответ, усиливают ответ или вызывают повышенный фон в произвольно выбранной степени (например, 10% по сравнению с контролем).
Неточность, возникающую из-за небольшого количества мешающего вещества, можно устранить, приготовив стандарт белка в том же буфере, что и анализируемый белок. Для более высоких несовместимых уровней мешающих веществ необходимы другие стратегии:
- Выберите другой метод анализа белка или версию того же метода анализа, который включает компоненты для преодоления помех.
- Провести диализ или обессолить образец для удаления мелких мешающих веществ (т. е. менее 1000 дальтон), таких как восстановители.
- Осадите белок в ТХУ или другом подходящем реагенте, удалите раствор, содержащий мешающий компонент, а затем снова растворите белок для анализа. На этом рисунке представлен обзор того, как методы белкового диализа используются для удаления веществ, которые могут загрязнять образцы белка и мешать последующим приложениям.
Рис. 1. На приведенной здесь схеме показано, как можно использовать диализную кассету для очистки от белков.
3 мл 1 мг/мл IgG в 0,1 М трис-буфере, рН 7, внутри кассеты для диализа помещают в 1000 мл 100 мМ PBS с рН 7,6. Старый диализат выбрасывают и заменяют 1000 мл 100 мМ PBS с pH 7,6. IgG слишком велик, чтобы проникнуть в поры мембраны; следовательно, количество IgG внутри кассеты остается постоянным. Концентрация трис-буфера падает ниже 0,01 М внутри кассеты по мере того, как трис-буфер диффундирует наружу, а в него диффундирует буфер PBS. Опять старый диализат выбрасывают и заменяют 1000 мл 100 мМ PBS с pH 7,6. IgG внутри кассеты остается постоянным. Буфер Tris внутри кассеты падает почти до неопределяемого уровня. Буфер внутри кассеты представляет собой 100 мМ PBS с pH 7,6.
- Скачать: Удаление мешающих веществ
- Скачать: Технический справочник по очистке белков
Межбелковая вариация
Каждый белок в образце отвечает уникальным образом в данном анализе белка. Такая межбелковая вариация относится к различиям в количестве окрашивания (абсорбции), полученным при одновременном анализе одной и той же массы различных белков одним и тем же методом.
Эти различия в цветовой реакции связаны с различиями в аминокислотной последовательности, изоэлектрической точке (pI), вторичной структуре и наличии определенных боковых цепей или простетических групп.
В зависимости от типа образца и цели проведения анализа вариации между белками являются важным фактором при выборе метода анализа белка и выбора соответствующего стандарта анализа (например, BSA или BGG). Методы анализа белков, основанные на аналогичной химии, имеют сходные межбелковые вариации.
Рис. 2. Стандартные кривые. Пример стандартных кривых с использованием очищенного BSA и BGG с набором для анализа белков Pierce BCA, иллюстрирующих различия в интенсивности окраски двух разных белков.
Белково-белковая вариация белковых анализов
Белковые анализы различаются по своей химической основе для обнаружения специфичных для белка функциональных групп. Некоторые методы анализа обнаруживают пептидные связи, но ни один анализ не делает этого исключительно.
Вместо этого каждый белковый анализ обнаруживает одну или несколько различных конкретных аминокислот с большей чувствительностью, чем другие. Следовательно, белки с разным аминокислотным составом дают окраску с разной скоростью или интенсивностью в любом заданном анализе белка.
В следующей таблице сравнивается межбелковая изменчивость цветового отклика нескольких анализов белков Thermo Scientific Pierce. Эти данные служат в качестве общего руководства для оценки различий в реакции между образцами белка. Однако, поскольку сравнения проводились с использованием одной концентрации белка и буфера, их не следует использовать в качестве точных калибровочных факторов.
Эта информация о вариабельности полезна при выборе стандарта белка. Например, когда анализируемый образец представляет собой очищенное антитело, бычий гамма-глобулин (BGG, белок № 5) будет более точным стандартом, чем бычий сывороточный альбумин (BSA, белок № 1). Эти данные также указывают на важность указания того, какой стандарт анализа использовался при сообщении результатов анализа белка.
Для каждого из представленных здесь анализов белков было проанализировано 14 белков с использованием стандартного протокола для пробирок. Рассчитывали чистую (с поправкой на контрольную пробу) среднюю абсорбцию для каждого белка. Чистая абсорбция для каждого белка выражается как отношение к чистой абсорбции для BSA (например, отношение 0,80 означает, что белок дает 80% цвета, полученного для эквивалентной массы BSA). Все концентрации белка составляли 1000 мкг/мл, за исключением анализа Micro BCA, в котором концентрация составляла 10 мкг/молоко.
Таблица 2. Обзор анализов белков.
| Результаты | BCA (Примечание 1) | Micro BCA 9 0110 | Модифицированный Лоури | Кумасси плюс | Кумасси (Брэдфорд) | Пирс 660 нм |
| Относительная однородность | Высокая | Высокая | Высокий | Средний | Низкий (Примечание 2) | Низкий |
| Коэффициент вариации | 14,7% | 11,4% | 11,9% | 28,8% | 38,2% | 37% |
| Стандартное отклонение | 0,15 | 0,12 | 0,13 | 0,21 | 0,26 | 0,27 |
| Среднее отношение | 1,02 | 1,05 | 1,09 | 0,73 | 0,68 | 0,74 |
| Тестированные белки | ||||||
1. Альбумин, бычья сыворотка 90 110 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 |
| 2. Альдолаза, мышцы кролика | 0,85 | 0,80 | 0,94 | 0,74 | 0,76 | 0,83 | 3. альфа-химотрипсиноген | 1,14 | 0,99 | 1,17 | 0,52 | 0,48 | — |
| 4. Цитохром С, сердце лошади | 0 .83 | 1,11 | 0,94 | 1,03 | 1,07 | 1,22 |
| 5. Гамма глобулин бычий | 1,11 | 0,95 | 1,14 | 0,58 | 0,56 | 0,51 |
6. IgG крупного рогатого скота | 1,21 | 1,12 | 1,29 | 0,63 | 0,58 | — |
| 7. IgG человека | 1,09 | 1,03 | 903 52 1,130,66 | 0,63 | 0,57 | |
| 8. IgG мыши | 1,18 | 1,23 | 1,20 | 0,62 | 0,59 | 0,48 |
| 9. IgG кролика | 1,12 | 1,12 | 1,19 | 0,43 | 0,37 | 0,38 |
| 10. IgG овец | 1,17 | 1,14 | 1,28 | 0,57 | 0,53 | 9035 2 —|
11. Инсулин, поджелудочная железа крупного рогатого скота | 1,08 | 1,22 | 1,12 | 0,67 | 0,60 | 0,81 |
| 12. Миоглобин, сердце лошади | 0,74 | 0,92 | 0,90 | 1 .15 | 1,19 | 1,18 |
| 13. Яичный альбумин | 0,93 | 1,08 | 1,02 | 0,68 | 0,32 | 0,54 |
| 0,89 | 0,98 | 0,92 | 0,90 | 0,84 | 0,8 | 9010 5|
| 15 альфа-лактальбумин | — | — | — | — | — | 0,82 |
16. Лизо займ | — | — | — | — | — | 0,79 |
| 17. Ингибитор трипсина соевый | — | — | — | — 901 10 | — | 0,38 |
| Межбелковые вариации анализов белков Thermo Scientific Pierce Примечания: 1. Анализ на совместимость с восстанавливающим агентом (BCA-RAC) также показал низкий коэффициент вариации. 2. Тест Bio-Rad Bradford Protein Assay, протестированный с теми же белками, что и наш анализ Coomassie (Bradford), показал очень высокий коэффициент вариации (46%), что соответствует очень низкой относительной однородности. | ||||||
Расчеты и анализ данных
В большинстве анализов белков концентрация белка в образце определяется путем сравнения результатов анализа с ответами серий разведений стандартов, концентрации которых известны.
Образцы белка и стандарты обрабатываются таким же образом, смешивая их с реагентом для анализа и используя спектрофотометр для измерения оптической плотности. Отклики стандартов используются для построения или расчета стандартной кривой. Затем значения абсорбции неизвестных образцов интерполируются на график или формулу стандартной кривой для определения их концентраций.
Очевидно, что наиболее точные результаты возможны только при одинаковой обработке неизвестных и стандартных образцов. Это включает их анализ в одно и то же время и в одних и тех же буферных условиях, если это возможно. Поскольку задействованы разные этапы пипетирования, повторения необходимы, если кто-то хочет рассчитать статистику (например, стандартное отклонение, коэффициент вариации) для учета случайной ошибки.
Рисунок 3. Сравнение точечных и линейных стандартных кривых. Интерполяция и расчет для тестового образца, имеющего оптическую плотность 0,6, приводят к значительному изменению значений концентрации белка.
В этом случае точечный метод явно дает более точную опорную линию для расчета тестовой выборки.
Хотя большинство современных спектрофотометров и устройств для чтения планшетов имеют встроенное программное обеспечение для анализа данных белкового анализа, технические специалисты часто неправильно понимают некоторые факторы. Потратив несколько минут на изучение и правильное применение принципов, задействованных в этих расчетах, можно значительно улучшить свои возможности в разработке анализов, дающих максимально точные результаты (см. соответствующие технические советы и ссылки).
- Загрузить: Определение длины волны для измерения белковых анализов
- Загрузить: Как использовать стандартную кривую
Количественный анализ пептидов
Для рабочих процессов, использующих протеомику с использованием масс-спектрометрии, важно измерять концентрацию пептида после этапов расщепления белка, обогащения и/или очистки C18, чтобы нормализовать вариации между образцами.
В частности, для экспериментов, использующих изобарическую маркировку, очень важно обеспечить маркировку равных количеств образца перед смешиванием, чтобы получить точные результаты.
Подобно методам анализа белков, для определения концентрации пептидов доступны различные варианты. Исторически сложилось так, что для измерения концентраций пептидов использовались УФ-видимая (А280) или колориметрическая методика анализа белка на основе реагентов. Часто используются анализы как BCA, так и микро-BCA. Хотя эти стратегии хорошо работают для образцов белков, эти реагенты не предназначены для точного обнаружения пептидов. В качестве альтернативы, количественные анализы пептидов — в колориметрическом или флуориметрическом формате — доступны для специфического количественного определения смесей пептидов. При принятии решения об использовании формата колориметрического или флуорометрического микропланшета для количественного анализа пептидов необходимо учитывать следующие важные критерии:
- Совместимость с типом образца, компонентами и рабочими процессами
- Диапазон анализа и требуемый объем образца
- Скорость и удобство для количества тестируемых образцов
- Наличие спектрофотометра или флуорометра, необходимого для измерения результатов анализа
В этих репрезентативных данных сравниваются результаты, полученные с помощью колориметрического и флуориметрического анализов.
Рисунок 4. Количественное сравнение колориметрического и флуорометрического анализов пептидов. Расщепления триптических пептидов получали из двенадцати клеточных линий. Концентрации расщепленных пептидов определяли с использованием наборов для количественного колориметрического анализа пептидов Thermo Scientific Pierce и наборов для количественного флуорометрического анализа пептидов Pierce в соответствии с инструкциями. Каждый образец анализировали в трех повторностях, и концентрацию каждого гидролизата рассчитывали с помощью стандартной кривой, построенной с использованием стандарта анализа гидролизата белка.
Рекомендуемое чтение
- Брэдфорд, MM. (1976) Быстрый и чувствительный метод количественного определения количества белка в микрограммах, использующий принцип связывания белка с красителем. Аналитическая биохимия. 72, 248-254.
- Smith, P.K., Krohn R.I., Hermanson G.T., et al. (1987) Измерение белка с использованием бицинхониновой кислоты.
