Атф в клетке находится в: 8. АТФ и другие органические соединения клетки

8. АТФ и другие органические соединения клетки

Аденозинтрифосфорная кислота — АТФ

Нуклеотиды служат составными компонентами для многих важных органических веществ, например для веществ выполняющих в клетке энергетическую функцию: АТФ, ГТФ и т. д.

Универсальным источником энергии во всех клетках служит АТФ — аденозинтрифосфорная кислота, или аденозинтрифосфат.
АТФ находится в цитоплазме, а также в клеточных ядрах и в двухмембранных органоидах (пластидах и митохондриях). Это вещество является основным источником энергии для биохимических процессов, которые протекают в клетке.
АТФ обеспечивает энергией все функции клетки: механическую работу, биосинтез веществ, деление и т. д. В среднем содержание АТФ в клетке составляет около \(0,05\) % её массы, но в тех клетках, где затраты АТФ велики (например, в клетках печени, поперечнополосатых мышц), её содержание может доходить до \(0,5\) %.

Строение АТФ

АТФ представляет собой нуклеотид, состоящий из азотистого основания — аденина, углевода рибозы и трёх остатков фосфорной кислоты, в двух из которых запасается большое количество энергии.

Связь между остатками фосфорной кислоты называют макроэргической (она обозначается символом ~), так как при её разрыве выделяется почти в \(4\) раза больше энергии, чем при расщеплении других химических связей.

АТФ — неустойчивая структура, и при отделении одного остатка фосфорной кислоты АТФ переходит в аденозиндифосфат (АДФ), высвобождая \(40\) кДж энергии.

Другие производные нуклеотидов

Особую группу производных нуклеотидов составляют переносчики водорода. Молекулярный и атомарный водород обладает большой химической активностью и выделяется или поглощается в ходе различных биохимических процессов. Одним из наиболее широко распространённых переносчиков водорода является никотинамиддинуклеотидфосфат (НАДФ).

 

 

Молекула НАДФ способна присоединять два атома или одну молекулу свободного водорода, переходя в восстановленную форму НАДФ·h3. В таком виде водород может быть использован в различных биохимических реакциях.
Нуклеотиды могут также принимать участие в регуляции окислительных процессов в клетке.

Витамины

Витамины — сложные органические соединения, которые требуются живым организмам для нормального протекания биохимических процессов в незначительных количествах. От других органических соединений витамины отличаются тем, что не являются источником энергии или исходных веществ для образования клеточных органоидов. Некоторые витамины синтезируются в самом организме, но в основном эти вещества поступают с пищей. А клетки бактерий могут самостоятельно производить почти все необходимые им витамины.

Витамины обычно называют буквами латинского алфавита. Их делят на две группы: водорастворимые (B1, B2, B5, B6, B12, PP, C) и жирорастворимые (A, D, E, K).

Витамины принимают участие в обмене веществ преимущественно как составная часть сложных ферментов. Их отсутствие или недостаток приводит к тяжёлым нарушениям жизнедеятельности организма.

Источники:

http://biouroki.ru/test/114.html

http://dic.academic.ru/dic.nsf/%20ruwiki/208102

Закон сохранения энергии — Энергетика и промышленность России — № 17 (325) сентябрь 2017 года — WWW.EPRUSSIA.RU

Газета «Энергетика и промышленность России» | № 17 (325) сентябрь 2017 года

Объяснить, почему количество энергии у человека снижается, можно с разных точек зрения.

Митохондрии в ответе за жизненную энергию

Самое первое объяснение предлагает биология. Ученым давно известно, что энергию человек получает за счет окисления сложных органических соединений. В клетках организма сложные вещества распадаются на простые, выделяя энергию, затраченную на их синтез. Энергия в организме человека запасается в виде молекул АТФ (аденозинтрифосфат или аденозинтрифосфорная кислота), которые являются универсальным источником энергии для всех биохимических процессов.

Молекулы АТФ синтезируются в митахондриях, которые расположены в цитоплазме каждой клетки. По сути дела, клетки могут извлекать, преобразовывать и хранить энергию только с помощью митохондрий. Митохондрии являются уникальным источником энергии и своеобразной «батарейкой» для организма.

Принцип действия этого механизма такой, что происходит преобразование потенциальной энергии (которая попадает в клетку через питание в виде углеводов, жиров и белков) в энергию, которую клетка может напрямую использовать. В процессе окисления освобождается большое количество энергии, которая сохраняется митохондриями в виде молекул АТФ. Ученые доказали, что за день в организме взрослого человека синтезируется и распадается эквивалент 40 кг АТФ.

Человеческие клетки содержат в среднем 1500 митохондрий. Благодаря наличию собственной ДНК митохондрии размножаются и самоуничтожаются независимо от деления клетки. Из-за постоянного последовательного деления митохондрий, направленного на производство энергии, их ДНК «снашивается». Истощается запас митохондрий в хорошей форме, уменьшая единственный источник клеточной энергии.

С точки зрения развития человеческого организма в клетках молодых больше митохондрий, которые вырабатывают энергию. Уже к двадцатипятилетнему возрасту включается так называемый «механизм умирания», замедляющий процесс размножения митохондрий, а затем полностью прекращающий его.

Если бы ученым удалось разгадать, что останавливает размножение митохондрий в клетках, то жизнь можно было бы продлить бесконечно. Ученые давно ведут поиски запасов молекул АТФ в организме, которые могут быть использованы организмом в критических ситуациях, требующих усиления энергообеспечения. Однако исследования показали, что резервуара, в котором могли бы находиться готовые к использованию молекулы АТФ, в организме нет.

Энергетическая анатомия человеческого тела

Неутешительные выводы ученых-биологов о том, что в человеческом организме нет «резервуара» для хранения энергии, вовсе не означают, что надо мириться с тем, что с возрастом ваша жизненная энергию будет медленно, но верно угасать. Современные ученые говорят о том, что вокруг нас находится бесконечный источник энергии. От того, насколько развита способность человека «черпать энергию из воздуха», и зависит, сколько у него жизненной энергии.

Считается, что у каждого человека энергетическая анатомия развита по‑разному. Некоторые сравнивают это явление с действием обычного трансформатора или адаптера. Каждый человек, как адаптер, имеет свой «уровень проводимости» энергии. Грубо говоря, кто‑то способен пропускать 12 вольт энергии, а кто‑то – 25 вольт. От этого и будет зависеть, сколько жизненной энергии человек сможет получить из окружающего мира.

Сейчас существует множество различных энергетических практик, регулярное выполнение которых обещает существенно прибавить жизненной силы и энергии. Росту «проводимости тела» способствует участие в творческих проектах, которые дают человеку вдохновение. К энергетическим практикам относятся также медитации и дыхательные упражнения.

Во время медитации человек, по сути, «останавливает ум», который в обычном состоянии постоянно двигается с неупорядоченными мыслями и отнимает немалое количество энергии. В состоянии спокойного безмысленного ума энергия начинает течь свободным потоком, давая человеку необходимые жизненные силы. В последние годы набирает популярность «светская медитация», или mindfulness. Это базовые практики, которые не связаны с религиозными традициями. Техника медитаций может отличаться, но суть одна – наблюдение дыхания и ощущений тела.

Дыхательные практики основаны на научных фактах. Подавляющее число молекул АТФ образуется именно при дыхании, и даже величину полученной организмом энергии принято определять по количеству кислорода, потребленного в процессе дыхания. Поэтому если просто подышать как следует, то часть сил восстановится. Поверхностное дыхание лишь поддерживает организм в живом состоянии. Но если человек использует все дыхательные зоны (живот, грудь, ключицы), он чувствует невероятный приток сил.

Уменьшить энергозатраты

Каждый день в распоряжении человека есть определенный объем энергии, который он постоянно расходует. Выражением нашей энергии являются наши эмоции, мысли, слова и действия.
Считается, что каждый объект, который есть в нашей жизни, «тянет внимание хозяина», тем самым съедая его энергию. Соответственно, чем больше объектов мы впускаем в нашу жизнь, тем больше энергии нам необходимо на их поддержание. Многие замечают, что чем больше у человека материальной собственности, тем менее свободным он становится. Ему необходимо поддерживать и заботиться о том, чем он владеет. Когда человек теряет или сознательно отказывается от части материальных вещей, он ощущает себя более свободным, и – более энергичным.

Но явления, которые тянут энергию из человека, могут быть не только материального характера. К таким явлениям, например, относят исполнение чужих ролей и реализацию не своих целей. Это особенно актуально в нынешнее время, когда людям навязывается определенная «успешная» модель поведения, которую они якобы должны реализовать.

Снижают жизненную энергию мощные продолжительные эмоциональные переживания. Пребывая в таком состоянии, человек накручивает себя, не может выйти из эмоции, пока энергия не иссушается. С другой стороны, подавление эмоций и непрожитых стрессов также негативно сказывается на жизненной энергии человека.

На расход энергии влияет пребывание в коллективах людей, имеющих разные ценности. Люди, находясь друг с другом, сознательно и бессознательно воздействуют друг на друга. В результате ценности человека могут смазываться, возникает интерес к вещам, не всегда полезным для данного человека.

При резком и частом переключении с одного дела на другое человек также теряет необходимую энергию. Некоторые вещи можно сделать, только достигнув определенного состояния. Когда происходят постоянные переключения, человеку не удается достичь нужного состояния и выйти на максимально эффективный режим работы. Человек тратит энергию, но дело не продвигается.

Специалисты советуют периодически производить «ревизию» того, чем вы владеете, – начиная от материальных вещей и заканчивая мыслями, чувствами и окружением. Уровень энергии человека можно увеличить через проработку себя и устранение из своей жизни наиболее энергозатратных явлений.

Молекулярные взаимодействия между теломерами, митохондриями и болезни старения

Стенограмма лекции

XXVI Всероссийской Образовательной Интернет Сессии для врачей

Общая продолжительность: 36:19

00:00

Владимир Трофимович Ивашкин, председатель межведомственного Научного Совета по терапии РАМН, академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор:

— Первая лекция. Она первая, может быть, не по значимости, но так выстроено в нашей программе.

Итак, дисфункция митохондрий, теломеры и процессы старения. Что такое митохондрии, наверное, знают все. Что такое процесс старения – тоже понятно, наверное, всем присутствующим.

Понятие «теломеры». Это понятие хорошо известно нам, начиная, наверное, со школьной скамьи, когда мы проходим биологию, на первом курсе медицинских вузов. Но буквально в последние годы с понятием «теломер» или «теломеры» стали связывать процесс старения.

В настоящее время печать, интернет пестрят сообщениями о том, что длина теломеров определяет продолжительность жизни человека. Вот такая мистическая связь, которая заставляет людей задавать вопрос – каким же образом? Что это за биологическая структура – теломеры? Каким образом теломеры определяют продолжительность жизни?

В этой пирамиде наших представлений все-таки необходимо убрать мистический компонент и попытаться расшифровать значимость теломеров в той системе координат, к которой мы уже привыкли. На примере тех биологических процессов или на основе тех биологических, биохимических процессов, которые проходят в наших органах и тканях, и которые мы ясно представляем.

Если мы посмотрим на наш возраст, то мы согласимся, наверное, что наша функциональная активность и интеллектуальная, физическая активность имеет характер примерно такой кривой. Вначале до определенного возраста наша многомерная активность растет. Потом она длительное время находится на плато, а затем она постепенно начинает убывать. Убывание этой многоплановой активности и означает, по существу, начало процесса старения в социальном плане.

Если параллельно проанализировать, что происходит с внутриклеточными органеллами, с клетками, тканями, то выясняется, что в процессе функционального угасания происходит снижение функций митохондрий. Развивается так называемая дисфункция (нарушение), определенные функциональные поломки со стороны теломеров.

Это, как вы видите, обоюдный процесс. Митохондрии, энергопродуцирующие элементы, и теломеры, поддерживающие целостность хромосом, обуславливают взаимную поддержку. Далее следует мышечная атрофия, присоединяется инсулиновая резистентность, диабет, кардиомиопатии различного генеза.

03:42

Если вы посмотрите на левую верхнюю часть слайда, здесь представлены специфические формы как раз теломеров. Это теломеры животных. Животные модели.

Вы видите, первоначально поле насыщено этими светящимися точками. Это животное wild type – обычное дикое животное. Скажем, мышь. Далее на специальных моделях мышей, у которых выключается функция теломеразы и нарушается функция теломеров, количество светящихся точек уменьшается (фаза G1). Наконец, фаза G4 – это достаточно продолжительная жизнь модельного животного с нарушенной функцией теломеров.

Они практически исчезают. Они действительно укорачиваются. Это совпадает со значительным снижением всех возможных жизненных проявлений модельного животного.

С биохимической точки зрения старение органов и тканей – это процесс, который сопровождается накоплением мутаций в митохондриальной ДНК. Мы знаем, что митохондрии имеют свою собственную ДНК. Она служит для поддержания целостности митохондрий и для генеза митохондрий.

Это накопление мутаций проявляется разобщением окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи митохондрий. Следовательно, снижением продукции АТФ, резким ростом кислородных радикалов и возникновением угрозы хронического оксидативного стресса. Как я уже отметил, в результате разобщения окисления и фосфорилирования снижается энергия, энергизация.

Именно как следствие де-энергизации происходит универсальное тотальное падение трансмембранного электрохимического градиента во всех без исключения клетках, включая и клетки центральной нервной системы, ибо основной машиной, которая поддерживает электрохимический градиент (большую разность электрических зарядов по обе стороны мембраны любой клетки), является Na* Ka* — АТФаза. Дефицит энергии приводит к угнетению активности Na* Ka* — АТФазы и падению трансмембранного электрохимического градиента.

По существу, смерть – это ни что иное как исчезновение трансмембранного электрохимического градиента.

06:51

Далее очень важно отметить, что в процессе старения происходит угнетение активности ключевых регуляторов митохондриальной активности или митохондриальных регуляторов. Это так называемые коактиваторы 1 ? и 1 ? peroxisome proliferator-activated receptor gamma. Его очень сложно переводить. Я привожу в оригинальной английской транскрипции (англоязычной транскрипции).

Мы с вами в последующем будем говорить о PGC-1? и PGC-1 ?, коактиваторах peroxisome proliferator-activated receptor gamma.

К чему приводит угнетение этих коактиваторов? К угнетению биогенеза митохондрий. В ответ на нагрузку, требующую увеличения продукции энергии, организм обычно реагирует увеличением плотности числа митохондрий или увеличением их пространственного объема. Но эта реакция начинает страдать.

Это приводит к нарушению контроля метаболических процессов: в частности, снижается активность глюконеогенеза. В стрессовой ситуации печень не в состоянии выбросить адекватное количество глюкозы за счет включения реакции глюконеогенеза.

Далее падает активность такого важного донатора энергии как ?-окисление жирных кислот. Жирные кислоты не могут проникнуть во внутреннее пространство митохондрий за счет нарушения когнитивного челнока. Это ведет к тому, что страдает процесс энергообразования.

Наконец, это сопровождается патофизиологическими нарушениями, инсулиновой резистентностью и хорошо известным нам диабетом пожилых, который резко ухудшает прогноз жизни пациента в виду развития полиморбидных изменений.

09:13

Давайте посмотрим, какие компоненты участвуют в этой теломер-митохондриальной оси.

Это хорошо известные вам митохондрии. Мы видим электронный вариант митохондрии – митохондрию с наружной и внутренней мембраной, с большим количеством крист.

Схема митохондрии. В правом верхнем углу представлен цикл Кребса или цикл трикарбоновых кислот. Основной энергетический поставщик восстановительных эквивалентов – митохондриальная дыхательная цепь. Межмембранное пространство, которое включает последовательность разных ферментов.

Здесь мы видим три пункта сопряжения: трансмембранная энергия протонов используется, чтобы быть преобразованной в молекулу АТФ. В процессе прохождения пары электронов образуется три молекулы АТФ. Это чрезвычайно эффективная система продукции АТФ внутренней мембраной митохондрий.

Раз мы говорим о теломерах, мы должны определить, где эти теломеры находятся. Мы с вами видим привычный нам кариотип. Очень красиво выстроенные 22 пары осмотических хромосом и пара половых хромосом. Видите, большая хромосома Х, определяющая женские признаки, и совершенно уступающая внешне и по своим функциональным возможностям мужская хромосома. По всей вероятности, от этого мужчины выглядят менее привлекательными, чем женщины.

Где находятся теломеры? Теломеры находятся на концах этих хромосом, на полюсах. Здесь теломеры представлены в виде красных кружков на полюсах хромосомы.

Что такое теломеры? Это большие, повторяющиеся структуры, содержащие большое количество гуанина. Здесь показана формула: тиамин, тиамин, аденин, гуанин, гуанин, гуанин. Этих повторений очень много.

Важнейшей частью теломеров является теломераза. Здесь показан ген TERC, который необходим, чтобы функционировала теломераза.

Теломераза – это обратная транскриптаза. Задача теломеразы состоит в том, чтобы восстанавливать теряемые при каждом клеточном делении нуклеотиды. Задача теломеразы состоит в том, чтобы задерживать процесс укорочения теломеров. Если нарушается функция теломеразы, фермента, который в определенной степени восстанавливает количественное отношение нуклеотидов в теломерах, процесс старения в значительной степени ускоряется. Не только процесс старения, но и процесс развития различных заболеваний.

13:00

Итак, возвращаясь к теломерам, мы с вами вспоминаем, что это нуклеопротеиновые комплексы, расположеннее на полюсах хромосом. Они решают триединую задачу.

Во-первых, поддержания целостности хромосом (очень важно). Мы знаем целый ряд заболеваний, при которых нарушается целостность хромосом. Далее. Они подавляют повреждения ДНК, которые вызываются чрезмерной активностью хорошо известного нам протеина 53. Наконец, хромосомы обеспечивают репарацию ДНК, восстанавливают количественное соотношение нуклеотидов на свободных концах хромосом.

Основным рабочим механизмом в теломерах является теломераза, обратная транскриптаза. Она компенсирует потери нуклеотидов теломерами при делении клеток. Снижение активности или выключение теломеразы приводит к целому ряду очень серьезных последствий.

Происходит необратимое укорочение теломеров при клеточном делении. Это как раз тот процесс, который приводит к ускорению старения. Наконец, повышается активность гена Р53, продуцирующего протеин Р53. Дисфункция теломеров, а по существу дисфункция, нарушение функций теломеразы приводит к истощению популяции стволовых/прогениторных клеток в пролиферирующих органах (костный мозг и ЖКТ).

Но помимо этого такое нарушение активности теломеразы сопровождается дегенеративными изменениями висцеральных, так называемых постмитотических органов, где пролиферативная активность включается лишь в случае необходимости (как компенсаторный процесс), а не является постоянным процессом. Это такие постмитотические органы как мозг, сердце, печень. В конечном счете, это приводит к быстрому старению и присоединению болезней старения.

15:21

Важным компонентом в этой теломер-митохондриальной оси является ген и протеин Р53. Ген Р53 находится на 17-й хромосоме. Внизу показана структура этого белка. Протеин Р53 является продуктом гена Р53, находящегося на 17-й хромосоме.

Что делает протеин и ген Р53? Они контролируют клеточный цикл, апоптоз и генетическую стабильность. Повышение активности Р53. Мы редко говорим о повышении активности Р53. Как правило, в наших клинических примерах мы говорим об угнетении активности, скажем, о мутациях в гене Р53, которые выводят клетку из-под генетического контроля и обуславливают процесс опухолевой трансформации.

Так вот сейчас мы с вами будем говорить о повышении активности продукта гена Р53, который обусловлен наличием гиперактивных аллелей в структуре этого гена. Что происходит? Остановка клеточного деления. Блокируется пролиферативный процесс, в частности в костном мозге, в ЖКТ и в других органах и тканях.

Остановка клеточного деления сопровождается апоптозом – стареющие клетки, не дающие дочерней популяции, приходят к необходимости апоптоза. Происходит опустошение стволовых/прогениторных клеток в организме животных, человека. Это обуславливает преждевременное старение – накопление старых неделящихся клеток, входящих все больше и больше в апоптоз, сопровождающийся клеточным истощением.

Снижение активности или дефицит Р53, о котором мы говорим очень часто, приводит к обратному процессу – к неконтролируемой пролиферации резидентных стволовых клеток. Это лежит в основе опухолевого роста, опухолевой трансформации клеток.

Следовательно, и избыточная продукция гена Р53 и его недостаточная активность, дефицит активности гена Р53, сопровождаются разными, разнонаправленными процессами, имеющими в том или в другом случае крайне негативные последствия.

Еще один участник в этом взаимодействии теломер-митохондриальной оси – это коактиваторы PGC-1 ? и PGC-1 ?. Коактиваторы – это протеины, кодируемые геном PPARGC. Я напоминаю, это peroxisome proliferator-activated receptor gamma. Это ген этого рецептора.

Посредством этого рецептора происходит взаимодействие с транскрипционными факторами генов, вовлеченных в энергетический метаболизм. Коактиваторам, чтобы проявить свою прогенетическую активность, необходимо взаимодействовать с определенными ядерными рецепторами.

19:14

Коактиваторы регулируют активность целого ряда очень важных внутриклеточных регуляторных путей. В частности, активность CREB – это cAMP (циклический аденозинмонофосфат), белок, зависящий от циклического аденазинмонофосфата (cAMP response element-binding protein), и система регуляторов NRFs (ядерные респираторные факторы).

Далее коактиваторы PGC-1обеспечивают прямую связь между внешними физиологическими стимулами и митохондриальным биогенезом. Например. В случае гипертрофии миокарда у пациентов с высоким системным артериальным давлением происходит стимуляция биогенеза митохондрий, увеличивается количество гипертрофирующихся митохондрий миокарда.

Как раз этим процессом заведует коактиватор PGC-1.

Далее эти коактиваторы очень важны для регуляции митохондриального клеточного дыхания. Репрессия коактиваторов сопровождается угнетением биогенза и функций митохондрий во всех проявлениях.

Здесь показаны эти коактиваторы. Peroxisome proliferator-activated receptor вместе со своими коактиваторами из цитоплазмы во время активации переносятся в ядро. В ядре они, как мы уже говорили, должны взаимодействовать с одним из ядерных рецепторов.

Здесь показан ретиноидный Х-ядерный рецептор. Взаимодействие коактиваторов peroxisome proliferator-activated receptor вместе с ретиноидным ядерным рецептором приводит к активации, дерепрессии определенных генов. Начинается экспрессия ДНК, то есть начинается экспрессии продукции матричной РНК. Она служит далее матрицей для синтеза различных белков: цитокинов, например, регуляторных белков.

Следовательно, это взаимодействие необходимо для дерепрессии ядерной ДНК и для продукции специфических белков-коагуляторов.

22:02

К чему же приводит дисфункция теломеров? Для этого в настоящее время создана модель. Это мышки, у которых выключаются оба аллеля теломеразы. Здесь показано: Tert с двумя минусами. Это мышки, у которых выключена теломераза (оба аллеля).

Чем проявляется дисфункция теломеров? Происходит, в первую очередь, укорочение теломеров. Мы с вами уже говорили, что теломераза необходима для поддержания своей структуры, для восстановления теряемых при каждом клеточном делении нуклеотидов. Здесь происходит укорочение теломеров. Это сопровождается угнетением системы коактиваторов PGC, снижением массы митохондрий и снижением продукции энергии, о чем мы с вами тоже говорили.

Это сопровождается атрофией пролиферирующих тканей. Происходит атрофия костного мозга, атрофия клеток ЖКТ. Следует отметить, что наблюдается и функциональная недостаточность постмитотических органов – таких как сердце, печень и других постмитотических органов (так называемых солидных органов).

Здесь показаны последствия дисфункции теломеров. Это сопровождается угнетением генов окислительного фосфорилирования митохондриальной дыхательной цепи. Это комплекс генов окислительного фосфорилирования OXPHOS. Сюда входит АТФ-синтаза, цитохром С и цитохром С оксидаза.

Мы видим с вами три столбика. В гематопоэтических стволовых клетках, в печени и в сердце. Внутри диаграммы мы видим три сета, три набора этих разноцветных столбиков: зеленый, красный, синий.

Зеленый – это исходный фон функциональной активности АТФ-синтазы, уровня цитохрома С и цитохром оксидазы. Красные столбики – это жизнь животного (относительно короткое время) с выключенной теломеразой. Вы видите, активность этих ферментов окислительного фосфорилирования снижается. Синие столбики – это более продолжительная жизнь животных в условиях выключения теломеразы.

Вы видите, что практически все ферменты дыхательного цикла митохондрий в значительной степени угнетаются. Это хорошее доказательство нарушения функциональной активности митохондрий.

Здесь выключение толомеразы – та же самая модель – сопряжено со снижением митохондриальной ДНК. На левой стороне слайда вы видите – гематопоэтические стволовые клетки, печень и сердце. Вы видите, что по мере продолжения жизни с выключенной теломеразой количество ДНК в митохондриях этих тканей прогрессивно снижается.

Правая часть. Вы видите, здесь мы отмечаем интенсивность дыхания сердца и печени по скорости поглощения кислорода. Далее мы отмечаем с вами синтез АТФ и держание АТФ в клетках и тканях. Вы видите, что по мере продолжения жизни животных с выключенной теломеразной активностью происходит и угнетение дыхания, и снижение содержания АТФ, и снижение синтетической активности АТФ.

26:18

Здесь совершенно наглядно видно, что выключение теломеразной активности ассоциируется со снижением объемной плотности митохондрий в сердце и в печени. Слева – это митохондрии в интактных тканях. Затем количество митохондрий начинает уменьшаться при относительно коротком периоде жизни животных с теломеразной недостаточностью. Наконец, при более продолжительном периоде жизни в условиях теломеразной недостаточности, количество митохондрий существенно снижается.

Это видно на графиках. На них показана объемная плотность митохондрий. Мы видим с вами, что количество, объем митохондрий в клетках, тканях прогрессивно снижается на фоне дисфункции теломеров.

Итак, дисфункция теломеров сопровождается, как мы уже с вами уже отметили, их укорочением. Это, в свою очередь, сопряжено с функциональной недостаточностью постмитотических органов, со снижением уровня триглицеридов и холестерина, и с потерей жировой массы. Жировая масса, мы с вами хорошо понимаем, основной источник энергии.

Когда мы с вами говорили о делящихся тканях, нам было все понятно. Дисфункция теломеров, блокада пролиферации, апоптоз и так далее. Но что же происходит в постмитотических тканях? Мне кажется, на этом рисунке очень хорошо видны негативные последствия теломеразной недостаточности. В условиях теломеразной недостаточности происходит формирование дилатационной кардиомиопатии.

Вы видите справа: животные интактные. Толщина задней стенки левого желудочка значительная. Диастолический размер левого желудочка относительно небольшой. По мере продолжения жизни в условиях теломеразной недостаточности истончается задняя стенка левого желудочка (сверху вниз мы смотрим). В значительной степени увеличивается диастолический конечный объем.

Сочетание истончения стенок левого желудочка и увеличение диастолического конечного объема. Речь идет о развитии недостаточности.

Мы слева на графиках видим, что фракционное укорочение падает. Мы с вами прекрасно понимаем, что это можно объяснить в рамках закона Франка-Старлинга: укорочение длины мышц есть ни что иное как снижение сократительной функции. В конечном счете, диастола левого желудочка или размер левого желудочка увеличивается. Если вы представляете себе кулакообразную кривую закона Франка-Старлинга, то мы с вами легко можем понять, что выход или растяжение мышц или миоцита конкретного выше определенного значения сопровождается также падением сократительной функции.

Так что все это укладывается в классический закон Франка-Старлинга. Эта дилатационная кардиомиопатия сопровождается резким уменьшением сократительной функции.

30:03

Далее происходит потеря контроля над геном Р53. Это сопровождается угнетением активности коактиваторов PGC, уменьшением митохондриальной ДНК, подавлением глюконеогенеза, развитием кардиомиопатии и поливисцеральной недостаточности.

Выключение гена Р53 оказывает обратный эффект. Происходит восстановление транскрипции коактиватора PGC и восстановления содержания митохондриальной ДНК.

Для того чтобы не теряться в этом графике, посмотрите на синие и красные столбики (крайние справа на всех картинках). Синие столбики самые короткие. Это жизнь животных длительное время с включенным Р53. Красный крайний столбик – выключенный ген Р53 свидетельствует о восстановлении функций митохондриальной ДНК в сердце и печени и активности коактиваторов.

31:15

То же самое можно сказать в отношении функциональной активности. Выключение Р53 сопровождается восстановлением глюконеогенеза и нормализацией функции митохондрий.

Один из заключительных слайдов. Мы видим здесь ткани гемопоэтических стволовых клеток сердца и печени. Левые столбики – это теломеры интактных животных («звездное небо»). Средние столбики – это теломеры животных, которые только начинают жизнь в условиях выключения теломеразной активности. Яркость «звездного неба» начинает постепенно угасать. Это длина теломеров. Наконец, крайние правые столбики во флуоресцентном поле – это теломеры у животных, которые длительное время существуют с выключенной теломеразной активностью.

Вы видите, что «звездное небо» практически угасает. «Звездное небо» – это теломеры наших хромосом, хромосом животных. Угасание «звездного неба» означает укорочение теломеров и окончание практически жизни животных!

Итак. В заключение мы с вами должны сказать, что дисфункция теломеров сопровождается угнетением системы коактиваторов и последующим развитием митохондриопатии и метаболических нарушений, индукции апоптоза и полиорганной недостаточности.

Постмитотические ткани (сердце и печень) оказываются в состоянии энергетического дефицита. Идут потери фундаментальной способности вырабатывать адекватное количество АТФ.

В основе снижения функциональной активности при старении могут лежать: первичное угнетение коактиваров и митохондриальной функции, последующее нарастание продукции активных радикалов кислорода, как результат снижения активности комплекса ферментов окислительно-восстановительной цепи и сниженной экспрессии PGC-регулируемых генов антиоксидантной защиты.

Высокие уровни кислородных радикалов могут инициировать замкнутый цикл генотоксических повреждений с разрушением G-богатых теломеров (мы с вами говорили, что в теломерах G-обогащенные повторы), продолжающейся высокой активностью гена Р53, дальнейшей репрессией коактиваторов, прогрессирующей митохондриопатией и так далее.

Теломер-митохондриальная ось подвержена регуляторным воздействиям многих факторов. По всей вероятности, в последующих лекциях мы остановимся на этих заключительных формулах. Оказывается, продолжительность жизни на моделях животных возрастает на фоне ограничения калорий в рационе питания и сопровождается увеличением митохондрий и ростом дыхательной активности, поддержанием длины теломеров.

Голодная диета сопряжена с повышением активности целого ряда ферментов, стабилизацией коактиваторов, увеличением биогенеза митохондрий и их функций.

Эти регуляторные системы инактивируют Р53 и дерепрессируют экспрессию коактиваторов PGC.

Заключительная схема отражает всю теломер-митохондриальную ось. Дисфункция теломеров приводит к избыточной активности гена Р53. Это сопровождается остановкой роста тканей, старением и интенсивностью апоптоза, с одной стороны. С другой стороны, это сопровождается репрессией коактиваторов peroxisome proliferator-activated receptor gamma, развитием митохондриальной дисфункции и нарушением метаболических процессов во всей их широте и глубине.

Страдают стволовые клетки пролиферирующих органов. Страдают, как вы уже видели на примере дилатационной дисфункции, и постмитотические органы. Это, в конечном счете, приводит к старению и к развитию болезней старости.

Позвольте на этом закончить свою лекцию.

36:19

pribori oy — CheckLite HS Set

ID — № 1 002 650

Набор для высоко чувствительного микробиологического исследования    биомасс
                                        Набор на 100 исследований

CheckLite HS Set — набор для микробиологического исследования биомасс, основанный на измерении уровня АТФ. Набор содержит термостабильную люциферазу светлячков и АТФ разрушающие ферменты, разработанные Kikkoman Corporation. Набор CheckLite    – характеризуется легкостью в использовании, высокой чувствительностью и быстротой исследования на общую микробную загрязненность.

Принцип измерения
Биолюминесцентный реагент содержит люциферин светлячков и люциферазу. Люцифераза специфически взаимодействует с АТФ и катализирует следующую реакцию.

Количество биолюминесценции производимой в данной реакции прямо пропорционально количеству АТФ в образце.
Все живые клетки, включая, клетки микроорганизмов имеют АТФ, как собственный источник энергии. Поэтому общая клеточная масса может быть определенно измерена с помощью биолюминесценции, основанной на люциферазной реакции, после выделения (экстракции) АТФ из клеток, используя АТФ высвобождающий реагент, который имеется в наборе.

Хранение набора
Набор хранится в холодильнике при 2-8 0С. Не замораживать.

  Состав набора
 
1. Реагент с люциферин-люциферазой «Luciferin-Luciferase reagent HS»:
2 пузырька с темно-зеленой этикеткой (содержит D- Люциферин, очищенную светлячковую люциферазу, магнезии соль, TRICINE и ДДТ в лиофилизированной форме)
2. Восстанавливающий буфер для реагента с люциферин-люциферазой «Reconstitution buffer for Luciferin-luciferase»:
2 пузырька с этикеткой розового цвета по 5,5 мл – TRICINE буфер для растворения реагента с люциферин-люциферазой
3. АТФ выделяющий реагент «ATP releasing reagent»
5 мл х 2 пузырька с этикеткой светло-голубого цвета – содержит сурфактант, используемый для экстракции АТФ из микробных клеток.
4. АТФ удаляющий реагент «ATP eliminating reagent»:
2 пузырька красного цвета этикеткой. Содержит фермент для разрушения АТФ и буферные соли в лиофилизированной форме. 
5. Восстанавливающий буфер для АТФ удаляющего реагента «Reconstitution buffer for ATP eliminating reagent»:
5,5 мл х 2 пузырька  желтого цвета этикеткой – содержит ультрачистую воду для растворения АТФ удаляющего реагента.

Приготовление реагентов

1 Биолюминесцентный реагент «Bioluminescence reagent»:
(1) Реагент с люциферин-люциферазой находится под вакуумом – пузырек с темно-зеленой этикеткой
(2) Налейте восстанавливающий буфер из розового пузырька в открытый пузырек темно-зеленого цвета и оставьте в течение нескольких минут при комнатной температуре.
(3) Помешивайте пузырек аккуратно, чтобы не образовывались комочки. Перемешивайте до полного растворения
(4) Постарайтесь не дотрагиваться до края горлышка пузырька или верхушки резиновой пробки руками, потому, что иногда это увеличивает показатели бланк уровня реагента.
(5) В нормальном состоянии один пузырек люциферин-люциферазного реагента может быть использован более чем на 50 исследований.

2  АТФ удаляющий реагент «ATP releasing reagent»  
(1) АТФ удаляющий реагент находится под вакуумом – пузырек красного цвета этикеткой
(2) Налить Восстанавливающий растворитель «Reconstitution buffer for ATP eliminating reagent» из пузырька  желтого цвета этикеткой  в открытый пузырек с красного  цвета этикеткой и оставить в течение нескольких минут при комнатной температуре.
(3) Помешивайте пузырек аккуратно, чтобы не образовывались комочки. Перемешивайте до полного растворения
(4) Постарайтесь не дотрагиваться до края горлышка пузырька или верхушки резиновой пробки руками, потому, что иногда это увеличивает показатели бланк уровня реагента.
(5) В нормальном состоянии один пузырек АТФ удаляющего реагента может быть использован более чем на 50 исследований.

Инструкция по использованию набора.

1. Концентрация АТФ в живых клетках изменяется очень быстро. Поэтому, необходимо сразу  выделить АТФ из клеток для исследования, либо заморозить клетки сразу после взятия образца. Даже в случае экстракции, ингибирование или разрушение АТФ – разрушающими ферментами может быть необходимо для предупреждения снижения концентрации АТФ.
2. Приготовление образца
(1) Твердые образцы:
Приготовьте образец в стомахере или гомогенизаторе и затем используйте раствор для измерения
(2) Жидкие образцы:
Когда жидкий образец мутный, окрашенный или содержит ингибирующие ионы Cl- , необходимо развести образец.
3. Разрушение АТФ в исследуемом образце
(1) Поместите 1 мл исследуемого образца в тестируемую тубу.
(2) Добавьте 0,1 мл АТФ выделяющего реагента «ATP releasing reagent» в тестируемую тубу и хорошо перемешайте.
(3) Оставьте образец при комнатной температуре на 30 — 40 минут. Это время необходимо для хорошего воспроизведения результатов. Если вы исследуете много образцов, то необходимо соблюсти данный временной режим для каждого.
(4) После данных манипуляций необходимо использовать образцы для биолюминисцентного исследования см. ниже.

Измерение.
(1) Поместите 100 мкл приготовленного исследуемого образца (приготовление см. выше) и добавьте 100 мкл АТФ выделяющего реагента «ATP releasing reagent» в тестируемую тубу.
(2) Оставьте образец при комнатной температуре на 10-60 секунд для выделения АТФ из микробных клеток. Время, необходимое для экстракции варьирует в соответствии с видом микроорганизма. К примеру, оно составляет 10-20 секунд для выделения АТФ из бактериальных клеток и 60 секунд для выделения из дрожжевых клеток.
(3) Немедленно после экстракции, добавьте 100 мкл реагента с люциферин-люциферазой «Luciferin-Luciferase reagent» и произведите измерение уровня биолюминесценции на приборе Люминометр Lumitester C-100/(Kikkoman Corporation № 1002647).
(4) Для того, чтобы построить график измерения, необходимо сделать последовательные измерения количества биолюминесценции из поэтапных разведений АТФ стандартного раствора в соответствии с методом, описанным выше. 
(5) Подсчет количества микробных клеток (КОЕ), которые были обнаружены по данной методике, основан на сравнении соотношения между количеством АТФ (RLU) и числом КОЕ (CFU), полученном ранее в соответствии с традиционной методикой
Пример исследования E.coli см. ниже

Внимание
Не допускать попадания реагентов набора на кожу и в глаза. В случае попадания в глаза или на кожу немедленно смыть водой и обратиться к врачу.
Хранить в месте, специально предназначенном для реагентов, защищенном от контакта с детьми. Не допускать контаминации реагентами и исследуемыми образцами пищи или пищевой продукции.

Информация в формате pdf

Жизнь и смерть митохондрий / Хабр

Митохондрии – маленькие труженики или большие начальники?

Если вы думаете, что самая важная для нас история совместной жизни начинается во время свадьбы, то это совсем не так. Самая важная история совместной жизни каждого человека началась более миллиарда лет назад, когда наши далекие одноклеточные предки вынуждены были подписать «брачный контракт» с теми, кого мы сейчас называем митохондрии (см. теория симбиогенеза).

Митохондрии имеют две мембраны (внутреннюю и внешнюю) и собственный наследственный материал в виде ДНК (рис.1). На внутренней мембране митохондрий находится система окислительного фосфорилирования, работа которой обеспечивает окисление энергетических субстратов с образованием АТФ.

Рис. 1

. Схематическое строение митохондрии

В брачном контракте клетки и митохондрии нет пункта «в болезни и здравии», — и хорошо. Если митохондрия становится старой, клетка может ее убить в процессе митофагии, а митохондрии, в свою очередь, регулируют процесс апоптоза у недееспособных и старых клеток. Если процесс обоюдного контроля качества нарушается, запускаются механизмы старения. Нарушаются механизмы апоптоза, увеличивается количество свободных радикалов, не контролируемых митохондрией. Это вызывает системное воспаление, повреждение ДНК клетки. Таким образом, есть сильная взаимосвязь между МХ дисфункцией, возраст-зависимыми заболеваниями, старением организма и метаболическими дисфункциями [1]. Метаболическая дисфункция – неизменный всадник апокалипсиса старения.

«Как белка в колесе» — динамика митохондрий

Не вся вина за метаболические нарушения лежит на нашем переедании. Метаболические нарушения связывают, в первую очередь, с неспособностью митохондрий справиться с питательными веществами. Митохондриям в клетке приходится нелегко. Мы «кормим» свои клетки то слишком много, то слишком мало, а предъявляем им «заявку» выдать энергию в виде АТФ, количество которой точно должно соответствовать нашим потребностям. Для того чтобы регулярно «выкручиваться» из этой ситуации митохондрии и правда используют некоторые «движения» — деление (fission) и слияние (fusion). Эти «митодвижения» объединяют под названием «динамика митохондрий». Баланс между делением и слиянием митохондрий — центральный механизм биоэнергетической адаптации к метаболическим потребностям клетки [2, 3].

Больше всего митохондрий находится в тканях с высокими энергетическими потребностями, — мышцы, печень, бурая жировая ткань, мозг. Неудивительно, что и динамика митохондрий в этих тканях изучена лучше.

Итак, если в клетку какой-либо из этих тканей (кроме некоторых нейронов в мозге, об этом потом) поступает большое количество питательных веществ (поступление превышает затраты), то митохондрии находятся в разделенном (фрагментированном) состоянии. Если клетка находится в состоянии голода (поступления меньше затрат), то происходит слияние митохондрий и они находятся в соединенном состоянии. [3,4]. Так поддерживается гомеостаз клетки (рис.2).

Рис. 2 Регулирование морфологии и биоэнергетической эффективности митохондрий в ответ на избыточное или недостаточное поступление питательных веществ [из 2]

Клеточный метаболический гомеостаз зависит от баланса между потреблением питательных веществ и их расходом. Перемены в поставке питательных веществ приводит к клеточным адаптациям для восстановления баланса. Избыток питания приводит к фрагментации митохондриальной сети, что вызывает снижение биоэнергетической эффективности митохондрий. Это позволит избежать потерь энергии. Напротив, при метаболическом голоде митохондрии удлиняются, чтобы увеличить свою биоэнергетическую эффективность.

В чем хитрость этих движений? Если клетка находится в состоянии голода, то слияние митохондрий позволяет увеличить их биоэнергетическую эффективность (количество АТР, которое создается на молекулу питательного вещества). Если же в клетку поступает избыток питательных веществ, то их можно либо 1) запасти, либо 2)рассеять эту энергию в виде тепла. Задача митохондрий в этом случае, — рассеять больше энергии в виде тепла, запасти меньше в виде АТФ (накопление NADH и АФК приведет к окислительному стрессу). Фрагментация митохондрий позволяет им снизить биоэнергетическую эффективность, главным механизмом снижения которой считается «утечка» протонов.

Так что, мы ходим на работу, а жизнь митохондрий постоянно протекает в режиме цикла деления и слияния (рис 3).

Рис.3 Баланс энергопотребления и энерогообеспечения связан с соответствующими изменениями архитектуры митохондрий и их биоэнергетической эффективностью [из 3]
Физиологические процессы, связанные с увеличением спроса на энергию и снижением энергопоставок, (например, острый стресс, голодание и фаза G1/S) характеризуются удлинением митохондрий и дыханием, связанным с синтезом АТФ. С другой стороны, физиологические процессы, связанные с уменьшением спроса на энергию и увеличением ее поставок (высокий уровень питательных веществ, ожирение и диабет типа 2), связаны с фрагментацией митохондрий, выделением тепла или снижением функции митохондрий.

Здоровые циклы деления и слияния – залог метаболического здоровья клетки

Нормальный цикл деления митохондрий и их слияния является ключевым звеном контроля их качества. Почему? При делении митохондрий образуется две дочерние, одна из которых имеет более высокий мембранный потенциал и идет дальше в цикл слияния-деления, а другая, с более деполяризованной мембраной, остается отделенной до восстановления мембранного потенциала. Если потенциал восстанавливается, — она воссоединяется с митохондриальной сетью. Если она остается деполяризованной, то она элиминируется в процессе аутофагии, что является залогом качества пула митохондрий (рис.4).

Длительное ингибирование деления митохондрий (при длительном клеточном голодании) приводит к накоплению поврежденных митохондрий, которые не могут быть сегрегированы [3, 4].

С другой стороны, избыток питательных веществ приводит к ингибированию слияния митохондрий, что приводит к нарушению цикла митохондриальной динамики, увеличивает внутриклеточную митохондриальную гетерогенность. Да, при избытке еды фрагментация митохондрий протективна, однако длительная фрагментация, как и длительное слияние, вредна для контроля качества митохондрий. Не происходит селективного удаления, митохондриальная масса будет уменьшаться и состоять из небольших деполяризованных митохондрий.

Рис.4 Жизненный цикл митохондрий и его регулирование доступностью питательных веществ [из 3]

Митофузины – не просто какие-то белки

На молекулярном уровне слияние митохондрий является двухстадийным процессом, который требует координированного слияния внешней и внутренней мембран в ходе отдельных последовательных событий. У млекопитающих этот процесс регулируется тремя белками, которые относятся к GTPазам: Mfn1 и Mfn2 необходимы для слияния внешней мембраны, а ОРА1 – для слияния внутренней мембраны. Для деления нужны другие белки, — Fis1 и Drp1.

Роль белков-митофузинов была изучена в loss- and gain-of function studies. Мышки, мутантные по белкам-митофузинам, погибают еще в mid-gestation, потому что у них невозможным становится слияние митохондрий. Митофузины важны для процессов аутофагии и митофагии. Снижение экспрессии Mfn2 в кардиомиоцитах блокирует запуск процесса аутофагии, потому что блокируется слияние аутофагосом с лизосомами. Истощение Mfn2 приводит к снижению потенциала мембран митохондрий, для компенсации происходит снижение работы дыхательной цепи, возрастает поглощение глюкозы и снижается синтез гликогена. Клетка переходит на анаэробный глиоклиз, а это – путь к онкологическому перерождению клетки. Дефицит Mfn2 приводит к нейродегенеративным изменениям. Повышение экспрессии Mfn2 в скелетных мышцах повышает их чувствительность к инсулину.

Mfn1 выполняет сходные функции, однако, вероятно, в других тканях (экспрессия Mfn2 и Mfn1 различается в разных тканях) – Mfn1 экспрессируется в большей степени в сердце, печени, поджелудочной, яичках, а Mfn2 в сердце, скелетных мышцах, мозге, бурой жировой ткани.
Таким образом митофузины являются ключевыми регуляторами динамики митохондрий. Экспрессия митофузинов различна в различных органах, они обеспечвают биоэнергетическую эффективность и механизмы адаптации к доступности питательных веществ, а также от них зависит «судьба» клетки. Не удивительно, что митохондриальные fusion белки являются потенциальными таргетами фармакологических вмешательств [2, 5].

Гипоталамус, митохондрии, метаболическая дисфункция и старение

Динамика митохондрий важна во всех клетках. В бета-клетках поджелудочной железы митохондрии являются сенсорами питательных веществ и генераторами сигналов синтеза инсулина, в мышцах динамика митохондрий важна для регуляции метаболизма глюкозы и т.д. Однако человек не просто совокупность клеток разного типа, каждая из которых принимает самостоятельные решения. Организм – это система, у которой есть центральное регуляторное звено поддержания гомеостаза энергии и глюкозы. Этим главным регулятором является гипоталамус.

Гипоталамус расположен в промежуточном мозге и именно он обеспечивает взаимосвязь нервной и гуморальной систем регуляции. Нейроны гипоталамуса воспринимают, обрабатывают и реагируют на сигналы от жировой ткани (лептин), поджелудочной железы (инсулин), и прочие гормональные стимулы (грелин, холецистокинин, панкреатический полипептид и др.). Гипоталамус управляет деятельностью эндокринной системы человека благодаря тому, что его нейроны способны выделять нейроэндокринные трансмиттеры, стимулирующие или угнетающие выработку гормонов гипофизом. Иными словами, гипоталамус, масса которого не превышает 5 % мозга, является центром регуляции эндокринных функций и поддержания гомеостаза всего организма.

Еще Дильман (Дильман В. М «Большие биологические часы») указывал на ведущую роль гипоталамуса в планомерном развитии метаболической дисфункции, приводящей к ожирению, сахарному диабету, сердечно-сосудистым, онкологическим заболеваням и старению. Согласно сформированной Дильманом теории гиперадаптоза чувствительность рецепторов гипоталамуса к сигналам, поступающим от тканей организма (лептин, инсулин и др.) постепенно планомерно снижается с возрастом. Для того, чтобы вызывать его «ответ» нужно все больше и больше того или иного гормона, — больше инсулина, больше лептина. Развивается инсулин- и лептинрезистентность, метаболические заболевания, приводящие к старению и смерти.

В зависимости от выполняемых функций группы нейронов объединяют в ядра гипоталамуса. Одно из них – аркуатное (дугообразное) ядро является ключевым регулятором пищевого поведения и обмена веществ. В нем могут образовываться орексигенные нейропептиды (стимулируют аппетит) и анорексигенные (подавляют аппетит), относящиеся, соответственно к AgRP и POMC нейронам. Периферические сигналы (инсулин, грелин, лептин и др) влияют на экспрессию пептидов, стимулирующих либо подавляющих аппетит, что обеспечивает слаженность центральной регуляции (рис.5).

Рис. 5. Гипоталамический контроль метмболизма энергии. Мозг интегрирует метаболические сигналы (лептин, инсулин, грелин, PYY3-36) от периферических тканей, таких как поджелудочная железа, жировая ткань, желудок. В мозге специализированные нейронные сети координируют адаптивные изменения в поглощении и расходе пищи [из 5].

Так кто и как регулирует чувствительность нейронов гипоталамуса?

Изучение динамики митохондрий в тканях мозга показало, что динамика митохондрий играет существенную роль в способности нейронов гипоталамуса контролировать уровень глюкозы и гомеостаз энергии в организме [6,7,8].

В AgRP нейронах (hunger-promoting AgRP neurons), которые стимулируют аппетит и регулируют набор массы, голодание приводит к делению митохондрий, а high-fat feeding – к слиянию. То есть ответ митохондрий отличается от такового в большинстве других клеток.

Слияние МХ в этих нейронах регулирует электрическую активность в ответ на высокожировую диету, стимулируя выработку орексигенного пептида (AgRP пептида) оно необходимо для набора веса и отложения жира при избытке питательных веществ. Делеции Mfn1 и Mfn2 в этих нейронах приводили к меньшему набору веса у крыс за счет снижения уровня циркулирующего лептина.

РОМС нейроны (подавляют аппетит) имеют противоположную функцию, и динамика митохондрий в ответ на поступление питательных веществ у них иная. Снижение экспрессии митофузинов в этих нейронах приводит к нарушению связи митохондрий с ЭПС, а в результате – гиперфагия, лептинрезистентность и ожирение. При этом возрастало употребление пищи, а энергозатраты снижались.

Таким образом, ответ организма на высокожировую диету зависит от паттернов динамики митохондрий в нейронах гипоталамуса. Ремоделирование митохондрий в нейронах обеспечивает их ответ на поступление в организм питательных веществ, стимулирует выработку нейропептидов, которые будут либо стимулировать либо подавлять аппетит, влияя на метаболизм на уровне организма (Рис.6).

Рис.6. Метаболическая адаптация к стимулам окружающей среды [из 2]

В ответ на экзогенные стимулы Mfns вовлечены в трансдукцию метаболического сигналинга в разных органах, что обеспечивает поддержание гомеостаза энергии всего организма. В частности, в ответ на потребление пищи, изменения температуры, стресс или физические упражнения, бурая жировая ткань, мозг, сердце или скелетные мышцы адаптируют свой метаболизм для контроля питания, веса тела, сократительных функций, антиоксидантного ответа или чувствительности к инсулину.

Как повлиять на динамику митохондрий?

1. Питание и физические упражнения

Циклы питания Избыток пищи и высокожировая диета (HFD) ингибирует слияние митохондрий в клетках (в некоторых нейронах мозга механизм иной). Незавершенный цикл деления-слияния митохондрий нарушает процессы аутофагии → увеличивается внутриклеточная гетерогенность митохондрий → не происходит селективного удаления митохондрий → накапливаются митохондрии с дисфункцией.

Calorie restriction (fed/fasting cycle) стимулирует биоэнргетическую адаптацию, обеспечивая работу механизмов качества митохондрий.

2. Здоровые мембраны: стеариновая кислота, кардиолипин, фосфатидная кислота

От «здоровья» мембран митохондрий зависят все ключевые процессы, — аутофагия, митофагия, апоптоз, связь митохондрий с эндоплазматической сетью, динамика митохондрий. Мембраны клеточных органелл состоят из липидов и из белков. Ремоделирование этих мембран контролируется взаимодействиями между специфическими липидами и белками.

К насыщенным жирным кислотам относится пальмитиновая (С16) и стеариновая (С18). Показано, что употребление стеариновой кислоты (C18:0) стимулирует процесс слияния митохондрий. Действие ее связано с влиянием на митофузины. У мышей диетические добавки стеариновой кислоты могут частично восстанавливать митохондриальную дисфункцию, вызванную мутациями в генах Pink1 или parkin. В нейтрофилах людей, находящихся 2 дня на low-С18:0 диете, митохондрии находятся во фрагментированном состоянии (50% клеток имели фрагментированные МХ, 10 % соединенные МХ). Употребление стеариновой кислоты приводило у них к слиянию митохондрий через 3 часа [8]. Таким образом., стериновая кислота важна для поддержания циклов динамики митохондрий. Больше всего стеариновой кислоты находится в какао-бобах (31-34 %).

Фосфолипиды – основные компоненты мембран органелл. Они также регулируют динамику митохондрий, при этом их влияние различно [9].

Кардиолипин (СL) стимулирует деление митохондрий и слияние внутренних мембран.

Кардиолипин необходим для работы комплекса IV (цитрохром С оксидазы) электронтранспортной цепи. Кардиолипин находится практически исключительно во внутренней мембране митохондрий. С возрастом происходит снижение количества кардиолипина. Есть теория, что потеря функции кардиолипина связана с заменой насыщенных жирных кислот в его молекуле полиненасыщенными жирными кислотами. Для решения этого вопроса необходимо вводить в рацион насыщенные жиры, богатые, в первую очередь, стеариновой жирной кислотой.

Для повышения эффективности доставки насыщенных жирных кислот в мембрану возможно использование переносчиков. Например, – использование насыщенного фосфатидилхолина (дипальмитофосфатидилхолин и дисероилфосфатидилхолин), который, потенциально, сможет доставить насыщенные ЖК прямо в кардиолипин [10]. Холин, как переносчик, легко проходит через цитозоль и поступает в митохондрии.

Фосфатидная кислота (РА) ингибирует митохондриальное деление и стимулирует слияние внешних мембран (рис.7).

Рис.7 Регулирование слияния митохондрий фосфатидной кислотой (PA) и кардиолипином (CL) [из 9].

Во внешней мембране (ОМ) РА стимулирует митофузин-опосредованное (Mfn) слияние. Во внутренней мембране (IM) CL стимулирует Opa1-опосредованное слияние. Сокращения: ER — эндоплазматический ретикулум; MitoPLD,- митохондрия-локализованная фосфолипаза D.

3. Регуляция экспрессии митофузинов (белков, отвечающих за динамику митохондрий)

Все, о чем мы говорили выше (сalorie restriction, стеариновая кислота, фосфолипиды) действуют, влияя на экспрессию митофузинов.

Помимо этого, есть ряд препаратов, которые опосредованно могут влиять на динамику митохондрий. К ним можно отнести использование метформина.

Наиболее интересным является использование веществ, которые способны напрямую влиять на экспрессию митофузинов. Одним из потенциальных препаратов назван лефлюномид (leflunomide), который был одобрен FDA [5,11]. Он является индуктором экспрессии Mfn1 и Mfn2, а зарегистрирован был как препарат для лечения ревматоидного артрита.

Генная терапия митохондрий

Нарушение динамики митохондрий может быть связано с нарушением экспрессии белков, отвечающих за слияние и деление митохондрий. Помимо этого, нарушение функции этих белков может быть связано (и это и происходит чаще всего) с их мутациями. Тут есть два подхода к рассмотрению причинно-следственных взаимодействий нарушения функции митохондрий.

Ранее считалось, что образ жизни, в том числе переедание, приводит к образованию свободных радикалов, окислительному стрессу, мутациям митохондриального генома и, последовательно, нарушениям функциии митохондрий. Однако, в последнее время есть убедительные доказательства того, что мутации митохондриальной ДНК неизбежны, есть у всех (heteroplasmic DNA point mutations) и связаны с ошибками репликации, а не с оксидативными повреждениями, к которым митохондриальная ДНК довольно устойчива [12]. Уже на этапе оплодотворенной яйцеклетки часть наших митохондрий несут мутации. Со временем они делятся, мутантных митохондрий становится больше, они не могут нормально выполнять свою функцию.

Рис. 8 Клональное экспансия мутированных молекул мтДНК может приводить к митохондриальной дисфункции или может быть «спасено» компенсационным биогенезом [из 12].

Тут очень кстати можно было бы использовать редактирование генома митохондрий in vivo. Было показано, что для heteroplasmic DNA point mutations у мышей уже был достигнут значительный успех при помощи targeted zinc-finger nucleases (mtZFN) с доставкой при помощи аденовирусного вектора [13].

Перенос митохондрий

Другой многообещающий метод устранения дисфункции митохондрий – это трансплантация митохондрий. Суть этого подхода сводится к «замене» поврежденных митохондрий здоровыми экзогенными митохондриями. Впервые данный подход был использован клинически у детей с ишемией миокарда. Для трансплантации использовали аутологичные изолированные митохондрии, которые изолировали при прямой мышцы живота (делали биопсию, а затем готовили препарат), а затем вводили путем прямой инъекции [14]. Прорабатываются различные подходы введния митохондрий: прямое инъецирование изолированных митохондрий (локальное введение) и системное введение в кровоток, когда митохондрия сама «ищет» в какую клетку ей отправиться. Группы исследователей изучают возможность трансплантации митохондрий при болезни Паркинсона, ишемии печени, инсульте, митохондриальных заболеваниях [15].

Рис.9 Способы доставки экзогенных митохондрий в клетку

Автор Ольга Борисова

Литература

1. Kauppila, Timo ES, Johanna HK Kauppila, and Nils-Göran Larsson. «Mammalian mitochondria and aging: an update.» Cell metabolism 25.1 (2017): 57-71.

www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1550413116305022

2. Schrepfer, Emilie, and Luca Scorrano. «Mitofusins, from mitochondria to metabolism.» Molecular cell 61.5 (2016): 683-694.

www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1097276516001337#fig1

3. Marc Liesa, Orian Shirihai “Mitochondrial Dynamics in the Regulation of Nutrient Utilization and Energy Expenditure” Cell methabolism (2013): 491-506

www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1550413113001046#fig3

4. Ramos, Eduardo Silva, Nils-Göran Larsson, and Arnaud Mourier. «Bioenergetic roles of mitochondrial fusion.» Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics 1857.8 (2016): 1277-1283.

www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0005272816300858

5. Cunarro, Juan, et al. «Hypothalamic mitochondrial dysfunction as a target in obesity and metabolic disease.» Frontiers in endocrinology 9 (2018): 283.

www.frontiersin.org/articles/10.3389/fendo.2018.00283/full

6. Marcelo O.Dietrich et al. «Mitochondrial Dynamics Controlled by Mitofusins Regulate Agrp Neuronal Activity and Diet-Induced Obesity”.

www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867413010957#figs2

7. Steculorum, Sophie M., and Jens C. Brüning. „Sweet mitochondrial dynamics in VMH neurons.“ Cell metabolism 23.4 (2016): 577-579.

www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1550413116301176

8. Senyilmaz-Tiebe, Deniz, et al. „Dietary stearic acid regulates mitochondria in vivo in humans.“ Nature communications 9.1 (2018): 3129.

www.nature.com/articles/s41467-018-05614-6

9. Kameoka, Shoichiro, et al. „Phosphatidic Acid and Cardiolipin Coordinate Mitochondrial Dynamics.“ Trends in cell biology (2017).

www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0962892417301587

10.

raypeatforum.com/community/threads/mitolipin-liquid-saturated-phosphatidylcholine-pc-mix.10398

11. Miret-Casals, Laia, et al. „Identification of new activators of mitochondrial fusion reveals a link between mitochondrial morphology and pyrimidine metabolism.“ Cell chemical biology25.3 (2018): 268-278.

12. Kauppila, Timo ES, Johanna HK Kauppila, and Nils-Göran Larsson. „Mammalian mitochondria and aging: an update.“ Cell metabolism 25.1 (2017): 57-71.

13. Gammage et al. “Genome editing in mitochondria corrects a pathogenic mtDNA mutation in vivo” Nature medicine, 2017

www.nature.com/articles/s41591-018-0165-9

14. Emani, Sitaram M., et al. „Autologous mitochondrial transplantation for dysfunction after ischemia-reperfusion injury.“ The Journal of thoracic and cardiovascular surgery 154.1 (2017): 286-289.

www.jtcvs.org/article/S0022-5223

(17)30258-1/fulltext

15. McCully, James D., et al. „Mitochondrial transplantation: From animal models to clinical use in humans.“ Mitochondrion 34 (2017): 127-134.

www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1567724917300053

Что делают клетки, когда им нечем дышать

Могут ли клетки «измерять» количество кислорода? Зачем им это нужно? И как они реагируют в зависимости от его содержания? Долгое время механизм адаптации животной клетки к различной концентрации кислорода в окружающей среде был не понятен. Ясность в эти вопросы внесли работы Питера Рэтклифа, Уильяма Келина-младшего и Грегга Семенцы, которые в 2019 году удостоились Нобелевской премии по физиологии и медицине за исследования этого механизма. Что значит эта работа для современной науки и какие возможности для разработки новых стратегий в борьбе с раком и другими болезнями она открывает, рассказывает Екатерина Умнякова, старший научный сотрудник ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины». Лекция ученого состоялась накануне в Центральной библиотеке имени Лермонтова в рамках проекта «Нобелевка в Открытой гостиной 2019».

Почему мы не можем жить без кислорода

Все знают, что кислород — важный химический элемент для всего живого. В атмосфере содержится до 21% О2, и жизнь и для нас, и для животных, которые населяют нашу планету, без него фактически не представляется возможной.

Но почему мы без него не можем? Дело в том, что под воздействием этого важнейшего газа происходит конвертирование энергии. Насколько бы полезной и вкусной ни была наша еда, мы не можем использовать ее, не преобразовав в те формы, благодаря которым мы «расплатимся» за энергетические процессы внутри нас. Грубо говоря, наши клетки не умеют воспринимать еду, которую мы видим у себя на столе. Они могут получать энергию в форме молекулы АТФ (аденозинтрифосфат). Это, своего рода, энергетическая валюта нашего организма — все в итоге сводится к ней. Наш организм получает энергию в виде этой молекулы. И чтобы осуществить какие-то процессы, тоже затрачивается АТФ.

Под действием кислорода происходит выработка большого количества АТФ. Без кислорода это тоже возможно, но этот процесс идет гораздо менее эффективно и этого не хватит, чтобы обеспечить нашу жизнедеятельность. Да, конечно, есть много живых организмов, которым кислород не нужен — они нашли для себя другой окислитель, который можно использовать, и прекрасно себя чувствуют. Мы так не умеем, и я думаю, вряд ли когда-либо сумеем.

Без АТФ невозможно существование клеток, поэтому давно было понятно, что каким-то образом они должны реагировать на недостаток кислорода. Но до работ Питера Рэтклифа, Уильяма Келина и Грегга Семенцы было неясно, как именно наши клетки понимают, что в какой-то момент кислорода в среде становится недостаточно. Примечательно, что эти ученые представляют довольно разные области. Но, работая в своих направлениях, они параллельно пришли к одному и тому же и смогли изучить эти механизмы.

Лауреаты Нобелевской премии по физиологии и медицине Уильям Келин-младший, Питер Рэтклиф и Грегг Семенца. Источник: nobelprize.org

С чего все началось

Как известно, в эритроцитах находится гемоглобин, и именно он связывает кислород и доставляет его к тканям. Но здесь необходимо упомянуть о таком гормоне, как эритропоэтин. Он выбрасывается в кровь почками (некоторым образом его могут синтезировать также клетки печени) и служит сигналом для организма, чтобы вырабатывалось большее количество эритроцитов. Это, в свою очередь, приводит к тому, что ткани и клетки больше снабжаются кислородом.

Исследователи, которым была присуждена Нобелевская премия по физиологии и медицине в 2019 году, как раз изучали, как происходит образование этого гормона в организме, а именно — в каких случаях запускается его синтез. Грегг Семенца обнаружил регуляторный элемент — энхансер (небольшой участок ДНК, который после связывания с ним факторов транскрипции стимулирует транскрипцию с основных промоторов гена или группы генов — прим.ред.), который усиливает производство эритропоэтина. Параллельно такую работу проводил и Питер Рэтклиф.

Послебыло обнаружено, что именно с этим регуляторным элементом связывается какой-то белковый фактор, Грег Семенца назвал его HIF-фактор (Hypoxia-inducible factor). Далее выяснилось, что этот белок на самом деле не один. HIF состоит из двух частей: HIF-alpha, содержание которого зависит от концентрации кислорода, и HIF-beta, содержание которого не зависит от концентрации кислорода.

Таким образом, ученые обнаружили, что есть последовательность, с которой связывается регуляторный фактор и которая запускает гены в ответ на недостаток кислорода. В дальнейшем они показали, что это касается не только эритропоэтина, этот процесс запускается повсеместно, поскольку всем клеткам жизненно важно отвечать на недостаток кислорода.

Гемы белка гемоглобина. Источник: shutterstock.com

«Миксер для белков», «метки смерти» и HIF: как наш организм запускает или не запускает программу по выживанию

В наших клетках есть специальная молекулярная машина — протеасома. Фактически она работает как «миксер для белков»: обнаруживается белок, который по каким-то причинам уже не нужен, он получает «метки смерти» (не каждый белок отправляется в «миксер»), после в протеасоме его размолачивает на последовательности, и далее из этих аминокислот можно построить уже что-то другое. Уильям Келин обнаружил, что, когда кислорода достаточно, с HIF-alpha так и происходит.

Стоит отметить, что до исследования, связанного с HIF, Уильям Келин работал с другим объектом: он занимался исследованием довольно редкого синдрома под названием болезнь Гиппеля–Линдау. Ученый обнаружил, что при нарушении работы гена VHL (Von Hippel–Lindau) запускалось образование различных опухолей, как правило, это были опухоли спинного, головного мозга. Таким образом стало понятно, что этот ген очень важен для того, чтобы опухоли не развивались.

Также в процессе исследования обнаружилось, что в организме людей, у которых была нарушена работа белка, кодируемого этим геном, также было много различных продуктов, которые запускают фактор HIF. То есть он есть у них в больших количествах, и при этом никуда не убирается организмом, даже несмотря на нормальное количество кислорода в среде. Это натолкнуло на мысль, что VHL и HIF связаны. Эту загадку ученые разгадывали уже совместно, и вот к чему они пришли.

Если в среде недостаточно кислорода, то HIF-фактор уходит в ядро и связывается с той самой регуляторной последовательностью, которую обнаружил Грегг Семенца. Таким образом, запускается работа генов, которые нужны при ответе на гипоксию – низкое содержание кислорода в среде.

В случае же нормального содержания кислорода HIF-alpha разрушается. Как это происходит? Этот фактор имеет две аминокислоты, которые в присутствии кислорода и фермента пролилгидроксилазы преобразуются. В этом процессе задействованы очень сложные химические реакции, которые были расшифрованы этими тремя учеными. После этого, если у HIF-alpha появляются две этих гидроксильные группы, он может взаимодействовать с белком VHL. VHL-белок, в свою очередь, позволяет «меткам смерти» прикрепиться к фактору HIF1-alpha, и это, в свою очередь, отправляет его на разрушение в протеасому. Так что при нормальном содержании кислорода этот фактор не работает. И действительно, зачем? Ведь в этом случае не нужно отвечать на гипоксию и экстренно запускать программу по «выживанию».

Что еще показали ученые

Какие еще гены, помимо эритропоэтина, регулируются этим фактором? Это гены, которые запускаются при ангиогенезе, то есть при образовании и росте сосудов. Кроме того, это характерно для всех ферментов, которые участвуют в метаболизме. И наконец, это те гены, которые тем или иным образом способствуют выживанию или, наоборот, смерти клетки.

При активации генов, которые находятся под контролем фактора HIF-alpha, происходит усиление процессов гликолиза: глюкоза расщепляется, что в итоге дает нам энергию, или, иными словами, ту самую АТФ, которая нужна клетке. В нормальных условиях клетка может получить 36 молекул, а без кислорода — всего лишь две. То есть в таких условиях гены под контролем HIF-фактора пытаются сделать хоть что-то.

Дифференцировка клеток, превращение здоровых клеток в опухолевые. Источник: shutterstock.com

HIF-фактор может служить защитой от гибели клетки, если организм находится в условиях гипоксии короткое время. Но, если процесс хронический, они, напротив, запускают гибель клетки.

На что могут повлиять эти открытия на практике

На практике эти результаты открывают новые возможности по дальнейшему изучению адаптации организма к условиям, для которых характерно низкое содержание кислорода. Это не только высокогорье или морские глубины, но и космос.

Кроме того, это может стать причиной серьезного пересмотра патогенеза многих заболеваний. Учитывая новые знания, можно более эффективно лечить заболевания, связанные с нарушением снабжения органов и тканей кислородом. Можно также улучшить состояния пожилых людей, которые не могут в полной мере ответить на гипоксию тканей.

И наконец, HIF-фактор является сегодня довольно перспективной мишенью для исследователей, которые изучают способы блокирования роста опухолей. Уже обнаружено, что этот фактор бывает чрезвычайно активен в опухолевых клетках. Это приводит к тому, что опухоль прекрасно живет и развивается, обрастает новыми сосудами, которые питают ее кислородом. Ученые предположили, что, если блокировать этот фактор, мы сможем либо убить опухоль, либо хотя бы ослабить ее, предотвратить метастазирование. И сейчас разрабатываются ингибиторы для того, чтобы предотвратить действие HIF-фактора и попытаться сделать опухоли более уязвимыми.

Перейти к содержанию

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

Лечение НЕК-293Т с рекомбинантных цитокинов вызывает умеренное количество клеточной смерти в течение 48 ч (рис 1). Количество гибели клеток, индуцированной ФНО-альфа лечения аналогичен ранее опубликованных исследований ³⁰ и жизнеспособность клеток уменьшается после совместного введения нескольких цитокинов, которые больше итоговой суммы с любой цитокин одна также согласуется с литературой ^31,32. Возможность регулировать количество и типы цитокинов, лечения, а также сравнение коктейлей до отдельных цитокинов делают эту модель культуры клеток привлекательным для изучения специфических эффектов цитокинов воздействия на клетки почек. Кроме того, результаты очень воспроизводимым и легко достигается (рис 2). Соображения иметь в виду, включают в себя слияние клеток. Например, клетки, обработанные при 100% слияния не реагируют, а на одних и тех же концентраций цитокинов при обработке на 70-80% конфлюенс. Кроме того, количество каналов клетки прошли через должны быть найдены, а клеточный ответ мог быть под влиянием побывав в культуре слишком долго (более 8-12 недель после оттаивания). В то время как обработка культивируемых клеток цитокинами снижение жизнеспособности клеток и впоследствии митохондрий здоровье, это ни в коем случае не модель для сепсиса как таковой. Тем не менее, использование более клинически значимых модели, такие как использование клеток первичной почки, выделенные из мышей и / или лечения с естественным секретируемых цитокинов из стимулированных Thp1 клеток ^33, является естественным продолжением этой работы. Учитывая разрыв в понимании почечной недостаточности во время сепсиса, такие модели культуры клеток и оценку митохондрий может обеспечить первоначальное понимание механизмов, а также предварительный платформу для тестирования эффективности фармацевтических соединений, профилактических или вмешательство лечения.

Митохондрии выделяют из культивируемых клеток или тканей животныхсебе способность быстро оценивать влияние клеточных препаратов или прогрессирования заболевания на митохондриальной здоровья. Протоколы изоляции и оценки технически не требуя выполнения, и может быть легко модифицирована для использования с другими клеточных линий или первичных тканей. MIB и EB для каждого типа образца хорошие стартовые рецепты, которые могут быть скорректированы по мере необходимости, если частности клетку или ткань типа имеет различные требования. Например, добавление жирных кислот БСА, как правило, необходим для использования с нейронами, как в комплекте с спинного мозга протокола ^15,34. Способ разрушения клеток также может быть изменена с помощью шприца больше высылки или изменение в руки гомогенизации, а не с помощью дрели или наоборот. Кроме того, повторно гомогенизации первого центрифугирования гранулы, как это было сделано в спинного мозга митохондрий процедуры, которые могут потребоваться для получения удовлетворительного количество митохондрий. Хороший индикатор, что протокол изоляции производит жизнеспособные mitochondriявляется использование цитохрома с ELISA. Этот анализ легко и быстро альтернативой западной блот-анализа цитохром с-релизе, а также полезно оценка цитохрома с из митохондрий после лечения митохондрий с пептидами или других соединений ^19,27. Кроме того, TMRE могут быть использованы при разработке протокола, но важно, чтобы оценить митохондрии, выделенные из образца, который, как известно, быть здоровым. Кроме того, когда выделения митохондрии из тканей мыши, которые не описаны обычно в литературе, митохондрий печени может служить в качестве положительного контроля, а также использоваться, чтобы установить базовую линию. Например, как в данном протоколе, печень от каждого животного, как во время разработки протокола, а также экспериментов были также вырезали и использовали для выделения митохондрий. Другое соображение для приготовления это количество митохондрий, полученных в конце процедуры выделения. Если концентрация митохондрий составляет 1 мг / мл или менееРезультаты анализа могут оказаться ненадежными (неопубликованные наблюдения VDGM). Либо количество исходного материала, MIB рецепта или метода разрушения должны быть оптимизированы, прежде чем перейти к функциональных анализов. После того, как успешно протокола изоляции достигается, митохондрии могут быть также использованы в других анализах, таких как общего содержания АТФ и АТФ поколения ^13,14.

Протокол функция митохондрий описано здесь позволяет косвенного измерения митохондриальной поглощения в TMRE потенциального зондирования красителя с использованием стандартного флуоресцентного планшет-ридер. После митохондрии были выделены и соответствующие химические вещества добавляют, они инкубировали с TMRE а затем осаждали. При обработке целых клеток или животных и выделение митохондрий до ΔΨ оценку, не оправдав такие переменные, как с множественной лекарственной устойчивостью транспорта или потока АТФ избежать. Количество флуоресценции в надосадочной жидкости затем анализируют с пониманием, что здоровее митохондриичем сильнее их ΔΨ и, следовательно, более поглощение TMRE. В результате, количество флуоресценции в надосадочной жидкости должна быть меньше, в здоровых митохондрий и более вредных митохондрий. В том числе в EB-только лечение, кратное различие флуоресценции между этим элементом управления и несвязанных митохондрий может быть вычислена. Еще одним важным управления с каждого набора реакций перспективе является TMRE в одиночку. Результат от этого контроля обеспечивает максимально возможную флуоресцентную чтение. С TMRE добавлено реакций недавно разводили, есть естественной изменчивости. Например, TMRE только для чтения ~ 20000, 25000 и 30000 были достигнуты в разное время в процессе разработки протоколов. Если TMRE только сигнал намного больше, чем любой из обработанных образцов митохондрий и / или, если обработанные митохондрии не отличается от лечения, то изоляция в сочетании митохондрий, скорее всего, не увенчались успехом. Уменьшение ΔΨ как измерено отношение полученногопри следовании этого протокола похож на ранее сообщалось количествах для контроля, здоровых клеток ^2,35. Сравнение ΔΨ изменений из митохондрий, выделенных из контроля, необработанных НЕК-293Т и * 3 цитокин-клеток, обработанных показали, что снижение жизнеспособности клеток наблюдается в МТТ анализов приводит к снижению функции митохондрий. Это ридер анализа могут быть легко использованы с митохондриями, выделенными из любого источника и использовали для исследования моделей болезней, таких как БАС, как показано здесь ^13,14.

Несколько исследований использовали митохондрии конкретных флуоресцентных красителей для определения MOMP, которые являются важными в возникновении этого ридере анализа. Тем не менее, эти исследования либо использовать целые клетки для скрининга соединений, которые блокируют или вызывают MOMP ^35,36, исследовать новые ΔΨ красители зондирования ² или выявить другие форматы, такие как проточной цитометрии на микрочипе ^37. Этот протокол является уникальным в том, что она описывает объявлениеetailed метод, чтобы изолировать и использовать митохондрии быстро исследовать эффекты лечения цельноклеточная через ответ на известных ΔΨ изменяющих соединений. Этот протокол использует различные разобщителей и ингибиторов, и указывает, что любой из них будет вполне подходящим для оценки митохондриальной здоровья. Таким образом, в то время как этот отдельный следственные центры на митохондриальных изменений вследствие клеточного стресса или прогрессирующей клеточной дисфункции, протокол также может быть использован для изучения изменений в митохондриальной метаболизма путем использования конкретных соединений и / или добавлением электронных источников, таких как сукцинат и NADH ,

Важные соображения при выполнении изолированных оценку митохондрий включают последовательность объемов лечения с учетом митохондрий в MIB и разбавления их в EB непосредственно перед процедуры будет создана, и, используя митохондрии в пределах 3 часов изоляции, чтобы обеспечить их ΔΨ еще поддерживается.Выбор TMRE митохондрий по сравнению с другими конкретных флуоресцентных красителей, таких как JC-1 было связано с возможностью использования малых концентраций и простота анализа флуоресценции с использованием только одной длины волны. Этот метод может быть аналогичным образом проведена с использованием флуоресцентной микроскопии ^2,38 или проточной цитометрии ^37, однако использование в планшет-ридере занимает меньше времени и требует меньше ³⁵ оптимизации. Кроме того, этот протокол гораздо менее технически требовательный, быстрее выполнять, и более легко воспроизводимые по сравнению с использованием Кларка электрод ²² (Del Gaizo Мур, неопубликованные данные). Титрование суммы каждого митохондриальной лечения может обеспечить дальнейшее понимание функции митохондрий и оптимизации концентрации должны быть выполнены. Общий объем митохондриальных реакций можно регулировать номера количество образца, полученного в процессе выделения, а также в ряде реакций, необходимых лечения. Если это возможно, стандартное количество 50 μ; Л используется; Однако, всего лишь 20 мкл митохондрий производит надежные результаты.

В то время как ΔΨ коррелирует с потреблением кислорода, анализ представлены непосредственно не измеряет потребление кислорода. В то время как люминесцентные кислорода зондирования зонд, таких как MitoExpress были разработаны, по-видимому, чтобы избежать некоторых из недостатков использования Кларк электрода упомянутое выше, цена на реакцию и требование больших количеств митохондрий в анализе остаются ограничения. Таким образом, использование TMRE и классических разобщителей ΔΨ или ингибиторов имеет несколько преимуществ. Опять же, партия анализ нескольких образцов или многократных обработок / образец, воспроизводимость, низкое потребление исходного материала и / или меньшим количеством изолированными митохондриями, необходимого на реакции оказывают этот протокол привлекательным.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Чикагская программа по борьбе с огнестрельным оружием (CAGE) — Чикаго, Иллинойс

Чикагская программа по борьбе с огнестрельным оружием (CAGE) — Чикаго, Иллинойс Тип программы или федеральная программа Источник: Программа нацелена на насильственных преступников. Цель программы: Расследование незаконной покупки и передачи огнестрельного оружия. Конкретные группы, на которые распространяется стратегия: Незаконные покупатели огнестрельного оружия. Географическая зона, на которую распространяется стратегия: Чикаго, Иллинойс. Оценка: Внутренний сбор данных. Контактная информация: Сержант Кен Барнас Полицейское управление Чикаго 3340 West Fillmore Street Chicago, IL 60624 Телефон: 3127465884 Годы эксплуатации: Середина 1990-х годов по настоящее время. Чикагская группа по борьбе с огнестрельным оружием (CAGE) была создана в середине 1990-х годов в ответ на рост числа преступлений, связанных с огнестрельным оружием.Департамент полиции Чикаго считает, что необходим более активный подход: вместо того, чтобы сосредотачиваться исключительно на самом преступлении, насилие с применением огнестрельного оружия можно уменьшить путем расследования лиц, приобретавших оружие, которое использовалось для совершения преступлений, а также путем ареста и судебного преследования покупателей соломы, которые были источниками совершения преступлений. много этого незаконного оружия. В начале программы в команду CAGE были назначены только два офицера; к 1998 году, когда данные полиции показали, что дополнительные ресурсы могут привести к значительному сокращению незаконных закупок оружия, группа была увеличена до восьми специалистов полиции Чикаго и двух специальных агентов из ATF, которые приписаны к подразделению. Авторские права 1998 © Weststock. Любое огнестрельное оружие, обнаруженное на месте преступления, расследуется этим специальным подразделением. Сначала следователи получают серийный номер пистолета и направляют его в Национальный центр розыска ATF, который раскрывает информацию о производителе, FFL, который продал огнестрельное оружие, покупателе и утвержденную государством идентификацию владельца огнестрельного оружия покупателя (FOID). карта, если есть. Затем группа CAGE связывается с полицией штата Иллинойс и запрашивает информацию о том, сколько раз этого человека «допрашивали», то есть сколько раз торговец оружием информировал полицию штата о том, что владелец FOID пытался приобрести огнестрельное оружие или боеприпасы. .Мало того, что закон штата требует, чтобы FFL сообщал о каждой транзакции, FFL даже не имеет права показывать оружие или боеприпасы любому, у кого нет карты FOID. (FFL также обязаны уведомлять ATF, когда кто-то покупает более двух пистолетов за 1 неделю.) Закон также требует, чтобы покупатель сохранял записи об оружии в течение 10 лет. В случае продажи оружия другому лицу первоначальный покупатель должен убедиться, что новый покупатель имеет карту FOID и соответствует тем же государственным и федеральным требованиям для покупок огнестрельного оружия. Используя информацию, полученную от государственной полиции, команда CAGE начинает расследование, начиная с оружия, которое было обнаружено на месте преступления. Подразделение также работает со своими двумя агентами ATF, чтобы получить информацию обо всем оружии, которое когда-либо было приобретено конкретным лицом, на основе информации от ATF. При получении достаточных доказательств производится арест; если дело требует федерального обвинения, команда CAGE работает с прокуратурой США, чтобы дело было рассмотрено в федеральном суде (где наказания более суровы), а не в суде штата. Одной из сильных сторон команды CAGE является ее способность быстро завершить трассировку оружия — примерно за 24 часа по сравнению с 2 неделями, которые обычно требуются. Независимой оценки программы не проводилось, хотя подразделение собрало доказательства, свидетельствующие о том, что команде CAGE удалось выявить покупателей соломы и предотвратить попадание оружия на нелегальный рынок. Например, за период с 1 января по 8 октября 1998 года команда CAGE произвела в общей сложности 61 арест, оба из которых были совершены за тяжкие преступления (т.е.ж., незаконный оборот оружия и незаконная продажа) и проступок (например, несоблюдение записей). В период с 1 января по 30 сентября 1998 года по запросу команды CAGE на отслеживание ATF было зарегистрировано 874 единицы огнестрельного оружия. Из этого числа 154 единицы оружия были обнаружены с мест преступлений полицейским управлением Чикаго или другими местными правоохранительными органами, а 131 оружие было обнаружено командой CAGE во время расследования подозреваемых в покупке соломы или беглецов оружия. Остальное оружие было объявлено пропавшим без вести, украденным или пропавшим без вести иным образом.За тот же период команда CAGE провела 123 расследования, в результате которых был арестован 61 арест, упомянутый выше. К настоящему времени по 27 делам было вынесено 23 приговора с лишением свободы или условно; примерно 30 дел еще не рассмотрены. Перспективные стратегии сокращения насилия с применением огнестрельного оружия Отчет OJJDP

Тревожный отчет окружного прокурора о смерти агента АТФ

Отчет окружного прокурора округа Нассау о гибели Джона Капано в результате обстрела является первым официальным отчетом о том, что произошло днем, когда скончался федеральный специальный агент по борьбе с алкоголем, табачным оружием и взрывчатыми веществами.

Отчет сырой и тревожный:

Как мы узнаем, Капано был убит после того, как лейтенант полиции округа Нассау в отставке, владевший гастрономом в трех дверях от аптеки Сифорда, прыгнул на спину Капано и — полагая, что агент ATF выстрелил из пистолета возле головы владельца гастронома — приставил пистолет к грудной клетке агента и выстрелил «.

Узнаем, что на месте происшествия было четыре пистолета.У грабителя, владельца гастронома, аптекаря и одного из сотрудников полиции Нью-Йорка, не дежурившего, сбежавшего из гастронома вместе с владельцем Кристофером Герати на помощь после того, как сотрудник аптеки сообщил, что грабитель угрожал «убить всех» . »

Мы узнали, что Капано, Джерати и офицер полиции Нью-Йорка Джозеф Арбиа открыли огонь. Серебряный дробовик грабителя, как выяснилось позже, не сработал.Аптекарь, согласно отчету, схватил пистолет и выбежал на улицу, прежде чем неоднократно спрашивать Капано, пока агент боролся с Джеймсом МакГоуи: «Джон, что мне делать?»

Он не стрелял.

Подпишитесь на информационный бюллетень The Classroom.

Пандемия изменила образование на Лонг-Айленде. Выясни как.

Нажимая «Зарегистрироваться», вы соглашаетесь с нашей политикой конфиденциальности.

Капано стал жертвой ограбления. И когда столкнулся с МакГоуи, он поднял руки и начал пятиться.

Агент — проявив удивительную сдержанность, учитывая ужасающую бойню, связанную с ограблением аптеки в Медфорде несколькими месяцами ранее, — не вытащил пистолет до тех пор, пока МакГой не повернулся, чтобы бежать из аптеки.

Капано крикнул МакГою: «Брось пистолет.«Вместо этого МакГой направил оружие на Капано, прежде чем повернуться, чтобы бежать. Именно тогда Капано, преследуя его, выстрелил выстрелом, который попал МакГою в ягодицы.

То, что произошло, когда оба оказались снаружи, очевидно, не было зафиксировано восемью камерами наблюдения и другими доказательствами, изученными прокуратурой.

В повествовании отчета рассказывается о том, где оружие МакГоя лежит на земле, и он и Капано борются грудь к груди, оба мужчины держат руки на пистолете Капано.

«Кто плохой парень?» Герати неоднократно спрашивал, как только он и Арбия прибудут на место происшествия.

Капано, согласно отчету, не ответил ни Герати, ни фармацевту. Отрезвляет мысль о том, что не дежурный Капано, после того как ему угрожали оружием и преследовал грабителя из соседней аптеки, дрался за свою жизнь.

«У меня есть твое ружье, — сказал МакГой Капано, — согласно отчету, — я собираюсь застрелить тебя.«

Согласно отчету, события развивались за доли секунды. Было ограбление, погоня, драка и вмешательство Джерати и Арбиа, которые позже, после того, как МакГой проигнорировал команду показать свои руки, застрелили и убили грабителя.

Окружная прокуратура определила, что Арбия, дежурный офицер, убивший МакГои, и Герати, бывший офицер, ставший владельцем гастронома, убивший Капано, действовали разумно.

Что касается Джерати, в отчете отмечается: «Джерати … считал, что Капано пытался его убить. Возможно, это мнение было ошибочным, но оно не было объективно необоснованным».

Язык антисептик. Но он не принимает укол от безвременной смерти украшенного агента ATF в новогоднюю ночь.

ATF2, член семейства транскрипционных факторов CREB / ATF, при хроническом стрессе и после лечения антидепрессантами: модели на животных и мозг человека после смерти

Adler V, Fuchs SY, Kim J, Kraft A, King MP, Пеллинг J и др. (1995).Активация jun-Nh3-концевой киназы, опосредованная УФ-индуцированными повреждениями ДНК в клетках меланомы и фибробластов. Разница в росте клеток 6 : 1437–1446.

CAS PubMed Google Scholar

Ainsworth K, Smith SE, Zetterstrom TS, Pei Q, Franklin M, Sharp T. (1998). Влияние антидепрессантов на экспрессию дофаминовых рецепторов D1 и D2 и высвобождение дофамина в прилежащем ядре крысы. Психофармакология (Берлин) 140 : 470–477.

CAS Статья Google Scholar

Аммендруп А., Майярд А., Нильсен К., Обенхус А.Н., Серуп П., Драгсбек МО и др. (2000). Путь амино-концевой киназы c-Jun предпочтительно активируется интерлейкином-1 и контролирует апоптоз в дифференцирующихся бета-клетках поджелудочной железы. Диабет 49 : 1468–1476.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Aoshiba K, Yasui S, Nishimura K, Nagai A (1999).Истощение запасов тиолов вызывает апоптоз культивируемых фибробластов легких. Am J Respir Cell Mol Biol 21 : 54–64.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Барро М., Оливье Дж. Д., Перротти Л. И., ДиЛеоне Р. Дж., Бертон О., Эйш А. Дж. и др. (2002). Активность CREB в оболочке прилежащего ядра контролирует стробирование поведенческих реакций на эмоциональные стимулы. Proc Natl Acad Sci USA 99 : 11435–11440.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Boyer PA, Skolnick P, Fossom LH (1998). Хроническое введение имипрамина и циталопрама изменяет экспрессию мРНК субъединицы рецептора NMDA в головном мозге мыши. Количественное исследование гибридизации in situ и . J Mol Neurosci 10 : 219–233.

CAS Статья Google Scholar

Brady LS, Gold PW, Herkenham M, Lynn AB, Whitfield Jr HJ (1992).Антидепрессанты флуоксетин, идазоксан и фенелзин изменяют уровни мРНК кортикотропин-рилизинг-гормона и тирозингидроксилазы в головном мозге крыс, терапевтическое значение. Brain Res 572 : 117–125.

CAS Статья Google Scholar

Бремнер Дж. Д., Нараян М., Андерсон Э. Р., Стаиб Л. Х., Миллер Х. Л., Чарни Д. С. (2000). Уменьшение объема гиппокампа при большой депрессии. Am J Psychiatry 157 : 115–118.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Броды А.Л., Барсом М.В., Бота Р.Г., Саксена С. (2001). Префронтально-подкорковое и лимбическое звено опосредуют большое депрессивное расстройство. Semin Clin Neuropsychiatry 6 : 102–112.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Чуанг Д.М., Чен Р.В., Чалека-Франашек Э., Рен М., Хашимото Р., Сенаторов В. и др. (2002).Нейропротекторные эффекты лития в культивируемых клетках и животных моделях болезней. Биполярное расстройство 4 : 129–136.

CAS Статья Google Scholar

Клерк А., Харрисон Дж. Г., Лонг CS, Сагден PH (1999). Провоспалительные цитокины стимулируют подсемейства митоген-активируемых протеинкиназ, увеличивают фосфорилирование c-Jun и ATF2 и активируют белок c-Jun в миоцитах желудочков новорожденных крыс. J Mol Cell Cardiol 31 : 2087–2099.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Consogno E, Racagni G, Popoli M (2001). Изменения в CaM-киназе II мозга после длительного лечения десметилимипрамином. Нейропсихофармакология 24 : 21–30.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Cheh B, Welt T, Fischer AK, Erhardt A, Schmitt W., Muller MB et al (2002).Хронический психосоциальный стресс и сопутствующая повторяющаяся транскраниальная магнитная стимуляция: влияние на уровни гормонов стресса и нейрогенез гиппокампа у взрослых. Биологическая психиатрия 52 : 1057–1065.

CAS PubMed Статья Google Scholar

De Cesare D, Fimia GM, Sassone-Corsi P (1999). Сигнальные пути к пластичности CREM и CREB при активации транскрипции. Trends Biochem Sci 24 : 281–285.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Dowlatshahi D, MacQueen GM, Wang JF, Young LT (1998). Повышение концентрации CREB в височной коре и лечение антидепрессантами при большой депрессии. Ланцет 352 : 1754–1755.

CAS Статья Google Scholar

Древец В.С., Фрэнк Э., Прайс Дж. К., Купфер Д. Д., Грир П. Дж., Матис С. (2000).Визуализация рецепторов серотонина типа 1А при депрессии. Nucl Med Biol 27 : 499–507.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Drevets WC, Price JL, Simpson JR, Todd RD, Reich T., Vannier M et al (1997). Субгенуальные аномалии префронтальной коры при расстройствах настроения. Природа 386 : 824–827.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Д’Са К., Думан Р.С. (2002).Антидепрессанты и нейропластичность. Биполярное расстройство 4 : 183–194.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Думан Р.С., Хенингер Г.Р., Нестлер Э.Дж. (1997). Молекулярная и клеточная теория депрессии. Arch Gen Psychiatry 54 : 597–606.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Эдельман Д. Б., Мич Р., Джонс Ф. С. (2000).Белок гомеодомена Barx2 ​​содержит активаторный и репрессорный домены и взаимодействует с членами семейства CREB. J Biol Chem 275 : 21737–21745.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Эйлат Э, Мендлович С., Дорон А., Закут В., Спирер З. (1999). Повышенный апоптоз у пациентов с большой депрессией. Предварительное исследование. J Immunol 163 : 533–534.

CAS PubMed Google Scholar

Фарис М., Латинис К.М., Кемпиак С.Дж., Корецкий Г.А., Нел А (1998).Индуцированная стрессом экспрессия лиганда Fas в Т-клетках опосредуется через регулируемый киназой 1 MEK элемент ответа в промоторе лиганда Fas. Mol Cell Biol 18 : 5414–5424.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Феррер I, Бланко Р., Кармона М., Пуч Б., Домингес И., Виналс Ф (2002). Активные, зависимые от фосфорилирования MAP-киназы, MAPK / ERK, SAPK / JNK и p38 и субстраты специфических факторов транскрипции дифференциально экспрессируются после системного введения каиновой кислоты взрослой крысе. Acta Neuropathol (Berl) 103 : 391–407.

CAS Статья Google Scholar

Флинт К.Дж., Джонс Северная Каролина (1991). Дифференциальная регуляция трех членов семейства ДНК-связывающих белков ATF / CREB. Онкоген 6 : 2019–2026.

CAS PubMed Google Scholar

Grauer E (1998). Долгосрочные поведенческие эффекты стресса у крыс: возможные животные модели посттравматического стрессового расстройства.В Levy A, Grauer E, Ben-Nathan D, de Kloet ER (ред.). Новые рубежи в исследованиях стресса Модуляция функции мозга. Введение в биологию стресса . Harwood Academic Chur: Швейцария, стр. 225–233.

Google Scholar

Гупта С., Кэмпбелл Д., Дериджард Б., Дэвис Р. Дж. (1995). Регулирование фактора транскрипции ATF2 путем передачи сигнала JNK. Наука 267 : 389–393.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Холахан С.Дж., Моос Р.Х. (1991).Жизненные стрессоры, личные и социальные ресурсы и депрессия: 4-летняя структурная модель. J Abnorm Psychol 100 : 31–38.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Хуанг Л.Т., Холмс Г.Л., Лай М.К., Хунг П.Л., Ван К.Л., Ван Т.Дж. и др. (2002). Стресс материнской депривации обостряет когнитивный дефицит у неполовозрелых крыс с повторяющимися припадками. Эпилепсия 43 : 1141–1148.

PubMed Статья Google Scholar

Иванов В.Н., Ронаи З. (1999). Подавление экспрессии фактора некроза опухоли альфа путем активации фактора транскрипции 2 увеличивает индуцированный УФС апоптоз клеток меланомы на поздней стадии. J Biol Chem 274 : 14079–14089.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Карин М., Хантер Т. (1995).Транскрипционный контроль путем фосфорилирования белка: передача сигнала от поверхности клетки к ядру. Curr Biol 5 : 747–757.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Кендлер К.С., Кесслер Р.С., Уолтерс Е.Е., Маклин К., Нил М.С., Хит А.С., Ивз Л.Дж. (1995). Стрессовые жизненные события, генетическая предрасположенность и начало эпизода большой депрессии у женщин. Am J Psychiatry 152 : 833–842.

CAS Статья Google Scholar

Laderoute KR, Mendonca HL, Calaoagan JM, Knapp AM, Giaccia AJ, Stork PJ (1999). Экспрессия митоген-активированной протеинкиназы фосфатазы-1 (MKP-1) индуцируется условиями с низким содержанием кислорода, обнаруживаемыми в микроокружении солидных опухолей. Кандидат MKP для инактивации индуцируемой гипоксией стресс-активируемой протеинкиназы / активности N-концевой протеинкиназы c-Jun. J Biol Chem 274 : 12890–12897.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Laifenfeld D, Karry R, ​​Grauer E, Klein E, Ben-Shachar D (2002a). Антидепрессанты и стресс модулируют экспрессию и уровни белка двух генов, участвующих в пластичности нейронов, CAM-L1 и ламинина в головном мозге крысы. Израильская психиатрия 39 9000 8: 36.

Google Scholar

Laifenfeld D, Klein E, Karry R, ​​Ben-Shachar D (2002b).Регулируемые норэпинефрином гены, участвующие в пластичности, CAM-L1 и CREB, изменяются в посмертном мозге пациентов с депрессией. Нейропластичность 9 9000 8: 95

Google Scholar

Li XY (2001). Быстрая активация митоген-активируемой протеинкиназы p38 кортикостероном в клетках PC12. Шэн Ли Сюэ Бао 53 : 414–418.

CAS PubMed Google Scholar

Ли Дж., Гулд Т.Д., Юань П., Манджи ХК, Чен Дж. (2003).Влияние посмертных интервалов на фосфорилирование сигнальных белков. Нейропсихофармакология 28 : 1017–1025.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Личинио Дж. Вонг М.Л. (1999). Роль медиаторов воспаления в биологии большой депрессии: цитокины центральной нервной системы модулируют биологический субстрат депрессивных симптомов, регулируют системы, чувствительные к стрессу, и вносят вклад в нейротоксичность и нейрозащиту. Mol Psychiatry 4 : 317–327.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Lowther S, Katona CL, Crompton MR, Horton RW (1997). Сайты связывания [ ³ H] цАМФ в головном мозге не изменяются при депрессивных суицидах, но уменьшаются под действием антидепрессантов. Brain Res 758 : 223–228.

CAS Статья Google Scholar

Lucassen PJ, Muller MB, Holsboer F, Bauer J, Holtrop A, Wouda J et al (2001).Апоптоз гиппокампа при большой депрессии — незначительное событие и отсутствует в областях, подверженных риску чрезмерного воздействия глюкокортикоидов. Am J Pathol 158 : 453–468.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Маэкава Т., Сакура Х., Каней-Исии К., Судо Т., Йошимура Т., Фудзисава Дж. и др. (1989). Структура лейциновой молнии белка CRE-BP1, связывающегося с элементом ответа на циклический АМФ в головном мозге. EMBO J 8 : 2023–2028.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Maes M, Meltzer HY, Bosmans E, Bergmans R, Vandoolaeghe E, Ranjan R et al (1995). Повышение концентрации в плазме интерлейкина-6, растворимого интерлейкина-6, растворимого интерлейкина-2 и рецептора трансферрина при большой депрессии. J Влияет на Disord 34 : 301–309.

CAS Статья Google Scholar

Maes M, Song C, Lin A, De Jongh R, Van Gastel A, Kenis G et al (1998).Воздействие психологического стресса на людей увеличивает выработку провоспалительных цитокинов и Th2-подобную реакцию при тревожном состоянии, вызванном стрессом. Цитокин 10 : 313–318.

CAS Статья Google Scholar

Макино Х, Масака М, Мацусима Й, Канацука А, Ямото М, Кумагай А (1975). Влияние АКТГ, дексаметазона, адреналэктомии и стресса на содержание цАМФ в аденогипофизе и надпочечниках у крыс. Endocrinol Jpn 22 : 373–377.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Манджи ХК, Древец WC, Чарни Д.С. (2001). Клеточная нейробиология депрессии. Nat Med 7 : 541–547.

CAS Статья Google Scholar

Mayr B, Montminy M (2001). Регуляция транскрипции зависимым от фосфорилирования фактором CREB. Nat Rev Mol Cell Biol 2 : 599–609.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Мехта К.Д., Миллер Л. (1999). Ингибирование стресс-активируемой митоген-активируемой протеинкиназы p38 индуцирует экспрессию рецептора липопротеинов низкой плотности. Trends Cardiovasc Med 9 : 201–205.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Менкес Д.Б., Расеник М.М., Уилер М.А., Битенский М.В. (1983).Активация гуанозинтрифосфатом аденилатциклазы мозга при длительном лечении антидепрессантами. Наука 219 : 65–67.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Моришита С., Аоки С. (2002). Влияние трициклических антидепрессантов на активность протеинкиназы C в тромбоцитах кролика и человека in vivo . J Влияют на Disord 70 : 329–332.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Morrill AC, Wolfgang D, Levine MA, Wand GS (1993).Стресс изменяет активность аденилатциклазы в гипофизе и лобной коре головного мозга крысы. Life Sci 53 : 1719–1727.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Нестлер Э.Дж., Барро М., ДиЛеоне Р.Дж., Эйш А.Дж., Голд С.Дж., Монтеджиа Л.М. (2002). Нейробиология депрессии. Нейрон 34 : 13–25.

CAS Статья Google Scholar

Нестлер Э.Дж., МакМахон А., Саббан Э.Л., Таллман Дж.Ф., Думан Р.С. (1990).Хроническое введение антидепрессантов снижает экспрессию тирозингидроксилазы в голубом пятне крысы. Proc Natl Acad Sci USA 87 : 7522–7526.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Nestler EJ, Terwilliger RZ, Duman RS (1989). Хроническое введение антидепрессантов изменяет субклеточное распределение циклической АМФ-зависимой протеинкиназы в лобной коре головного мозга крыс. J Neurochem 53 : 1644–1647.

CAS Статья Google Scholar

Нибуя М., Нестлер Э.Дж., Думан Р.С. (1996). Хроническое введение антидепрессантов увеличивает экспрессию белка, связывающего элемент ответа цАМФ (CREB) в гиппокампе крысы. J Neurosci 16 : 2365–2372.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Огура А., Моринобу С., Кавакацу С., Тоцука С., Коматани А. (1998).Изменения регионарной мозговой активности при большой депрессии после успешного лечения антидепрессантами. Acta Psychiatr Scand 98 : 54–59.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Ouwens DM, de Ruiter ND, van der Zon GC, Carter AP, Schouten J, van der Burgt C et al (2002). Факторы роста могут активировать ATF2 посредством двухступенчатого механизма: фосфорилирование Thr71 через путь Ras-MEK-ERK и Thr69 через RalGDS-Src-p38. EMBO J 21 : 3782–3793.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Перес Дж., Тинелли Д., Бьянки Е., Брунелло Н., Раканьи Дж. (1991). ЦАМФ-связывающие белки в коре головного мозга крыс после введения селективных блокаторов обратного захвата 5-HT и NE с антидепрессивной активностью. Нейропсихофармакология 4 : 57–64.

CAS PubMed Google Scholar

Перес Дж, Тинелли Д., Брунелло Н., Раканьи Дж. (1989).цАМФ-зависимое фосфорилирование растворимых и сырых фракций микротрубочек коры головного мозга крыс после длительного лечения десметилимипрамином. Eur J Pharmacol 172 : 305–316.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Pham TA, Impey S, Storm DR, Stryker MP (1999). CRE-опосредованная транскрипция генов в пластичности нейронов неокортекса во время критического периода развития. Нейрон 22 : 63–72.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Плиакас А.М., Карлсон Р.Р., Неве Р.Л., Конради С., Нестле Е.Дж., Карлезон В.А. (2001). Измененная реакция на кокаин и повышенная неподвижность в тесте принудительного плавания связаны с повышенной экспрессией белка, связывающего элемент ответа цАМФ, в прилежащем ядре. J Neurosci 21 : 7397–7403.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Пополи М., Брунелло Н., Перес Дж., Раканьи Г. (2000).Протеинкиназы мозга, регулируемые вторичными мессенджерами: их функциональная роль и действие антидепрессантов. J Neurochem 74 : 21–33.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Rajkowska G (2000). Посмертные исследования расстройств настроения показывают измененное количество нейронов и глиальных клеток. Биологическая психиатрия 48 : 766–777.

CAS Статья Google Scholar

Rajkowska G, Miguel-Hidalgo JJ, Wei J, Dilley G, Pittman SD, Meltzer HY et al (1999).Морфометрические доказательства патологии нейрональных и глиальных префронтальных клеток при большой депрессии. Биологическая психиатрия 45 : 1085–1098.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Сапольский Р.М. (2000). Возможность нейротоксичности в гиппокампе при большой депрессии: учебник по гибели нейронов. Биологическая психиатрия 48 : 755–765.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Шелин Ю.И., Ван П.В., Гадо М.Х., Чернанский Ю.Г., Ванье М.В. (1996).Атрофия гиппокампа при повторяющейся большой депрессии. Proc Natl Acad Sci USA 93 : 3908–3913.

CAS PubMed PubMed Central Статья Google Scholar

Степто А., Виллемсен Г., Оуэн Н., Флауэр Л., Мохамед-Али В. (2001). Острый психический стресс вызывает замедленное повышение уровня циркулирующих воспалительных цитокинов. Clin Sci (Лондон) 101 : 185–192.

CAS Статья Google Scholar

Suzuki T, Yamakuni T, Hagiwara M, Ichinose H (2002).Идентификация ATF-2 как регулятора транскрипции гена тирозингидроксилазы. J Biol Chem 277 : 40768-40774.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Трентани А., Койперс С.Д., Тер Хорст Дж. Дж., Ден Бур Дж. А. (2002). Селективный хронический стресс-индуцированный in vivo ERK1 / 2 гиперфосфорилирование в медиальных префронтокортикальных дендритах Значение для корковой патологии, связанной со стрессом? Eur J Neurosci 15 : 1681–1691.

CAS Статья Google Scholar

Вайдья В.А., Думан Р.С. (2001). Депрессия — новые идеи нейробиологии. Br Med Bull 57 : 61–79.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Vedder H, Bening-Abu-Shach U, Lanquillon S, Krieg JC (1999). Регулирование мРНК глюкокортикоидного рецептора в клетках крови человека амитриптилином и дексаметазоном. J Psychiatr Res 33 : 303–308.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Виллнер П. (1997). Мезолимбическая дофаминовая система как мишень для быстрого антидепрессивного действия. Int Clin Psychopharmacol (Дополнение 3): 7–14.

Xia Z, DePierre JW, Nassberger L (1996). Трициклические антидепрессанты подавляют высвобождение ИЛ-6, ИЛ-1 бета и ФНО-альфа в моноцитах крови человека, а также ИЛ-2 и гамма-интерферон в Т-клетках. Иммунофармакология 34 : 27–37.

CAS PubMed Статья Google Scholar

Информатор из ATF: Американское огнестрельное оружие «Форсаж» оставило след «мест преступлений и мертвых тел»

Это расшифровка стенограммы срочно. Копия может быть не в окончательном виде.

ЭМИ ГУДМАН: Неудачная операция по отслеживанию потока оружия из Соединенных Штатов в Мексику вызвала отставку исполняющего обязанности директора Бюро алкоголя, табака, огнестрельного оружия и взрывчатых веществ.Прокурор США в Аризоне, офис которого активно участвовал в программе, также уйдет в отставку.

В рамках некогда секретной программы под названием Operation Fast and Furious федеральные агенты поощряли оружейные магазины США продавать тысячи единиц оружия посредникам мексиканских наркокартелей. Программа была предназначена для получения доступа к высокопоставленным фигурам преступных организаций Мексики. Но агенты потеряли из виду 2500 единиц оружия.

На прошлой неделе Министерство юстиции признало Конгрессу, что огнестрельное оружие, связанное со скандальной операцией АТФ по расследованию преступлений, использовалось как минимум в 11 насильственных преступлениях в Соединенных Штатах, включая убийство U.С. Агент пограничной службы. Между тем операция «Форсаж» ни разу не привела к арестам.

Исполняющий обязанности директора ATF Кеннет Мелсон недавно столкнулся с давлением Конгресса с требованием уйти в отставку. Его заменит прокурор США в Миннесоте Тодд Джонс. Ранее в этом месяце были назначены три ключевых куратора ATF в рамках подвергнутой резкой критике программы.

Кроме того, к нам присоединился один из агентов, которые помогли установить связь с операцией «Форсаж». Винсент Чефалу — специальный агент BATF.

Мы приветствуем вас в Democracy Now! Расскажите нам, что именно вы разоблачили, и о значении отставки главы Бюро по алкоголю, табаку и огнестрельному оружию. Сейчас его переводят.

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Совершенно очевидно, что мы получаем некоторое лидерство. Мы коллективно кричали по всей стране, на местах, о новом руководстве уже несколько лет. Жалко, что до этого пришлось дойти до того, как кто-то послушал. Так что из чего-то трагического может получиться что-то хорошее.Очевидно, давно пора сменить руководство.

ЭМИ ГУДМАН: Не могли бы вы рассказать о своей роли в разоблачении операции «Форсаж»? Я думаю, что, когда люди прислушиваются к описанию того, что он сделал, правительственных агентов, поощряющих продажу в американских оружейных магазинах мексиканским посредникам тысяч единиц оружия, чтобы каким-то образом заполучить мексиканские наркокартели, они довольно шокированы.

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Это была возмутительная схема, нелепая. То есть, я не могу придумать достаточно прилагательных.Но я хочу внести ясность: было такое же количество агентов, преданных делу и желающих поставить свою карьеру и свое личное благополучие на кон, чтобы выйти вперед. В этом конкретном сценарии я был просто проводником, потому что стал хорошо известен своими попытками выявить и исправить недостатки и этические упущения в управлении ATF за последние пару лет, которые привели к этому. Это не единственный провал Бюро под нашим нынешним руководством и нашими руководителями. Практически все наши программы потерпели неудачу за последние три-четыре года, и нам нужно вернуть это агентство в нужное русло, потому что это одно из самых важных агентств общественной безопасности и безопасности, которые у нас есть.

ЭМИ ГУДМАН: Итак, вы впервые пожаловались на что, как, например, шесть лет назад, в 2005 году?

ВИНСЕНТ ЧЕФАЛУ: В 2005 году, что касается региональных проблем грубого бесхозяйственности, растраты, мошенничества и злоупотреблений, этические упущения со стороны руководства полевого подразделения Сан-Франциско, что было хорошо задокументировано. Такого рода катапультирование меня в положение из-за моего стажа и того, что я знаю так много людей, что мои телефоны и электронная почта начали звонить, и я осознал, что это происходит по всей стране, что эпоха репрессий и это весь драконовский менталитет «делай, как мы говорим, а не как мы», из-за отсутствия руководства и директоров по совместительству и исполняющих обязанности директоров, я был в состоянии попытаться помочь некоторым из этих других агентов, которые страдали от такого же рода возмездие за то, что поступили правильно, соблюдая присягу.А потом такого рода —

ЭМИ ГУДМАН: Вы столкнулись с возмездием?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: О, я столкнулся с ужасающей и ужасной расправой за всю свою жизнь —

ЭМИ ГУДМАН: В Бюро по алкоголю, табаку и огнестрельному оружию?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Да.

ЭМИ ГУДМАН: Что с тобой случилось?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Совершенно верно. Что ж, в ходе всего этого — и я постараюсь быть как можно более конкретным — я думаю, что было два или три отстранения, три или четыре выговора, пять переводов за 16 месяцев.Два года я сидел в клетке, по сути, в пустом офисе, ничего не делая, дважды уволили.

ЭМИ ГУДМАН: Вы в настоящее время работаете в BATF?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Я. Мне прямо сейчас поступило предложение о прекращении действия. Но да, я сейчас спецагент АТФ. И мои поверенные в Krevolin & Horst отвечают на эти предложения.

ЭМИ ГУДМАН: А где ты работаешь? Ты действительно работаешь, когда якобы ты там?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Я дежурил по месту жительства.

ЭМИ ГУДМАН: Значит, они платят вам за то, чтобы вы не работали?

ВИНСЕНТ ЧЕФАЛУ: Послушайте, они делали это в течение двух лет и отрицали OIG и другие надзорные органы, что это имело место.

ЭМИ ГУДМАН: Винсент Чефалу, вы были одним из федеральных агентов, которых послали, чтобы побудить эти американские оружейные магазины продавать тысячи единиц оружия посредникам для мексиканских наркокартелей?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Нет, абсолютно нет.Это были агенты — в основном полевой дивизион Феникса. И, как мы теперь знаем, программа распространялась и на другие полевые подразделения. Вы знаете, сенатор Грассли, председатель Исса и комитет с Рейтинговым членом Каммингс все это изучают. Но нет, лично я не участвовал. Я был просто сторонником — люди боялись выступить вперед, потому что они видели по всей стране то, что произошло со мной и другими, такими как Джей Добинс, Рене Жакес, Джон Додсон и другие разоблачители, которые выступили вперед, чтобы поступить правильно.Поэтому они использовали меня и этот веб-сайт cleanupatf.org, чтобы передать информацию сенаторам и конгрессменам для осуществления надзора.

ЭМИ ГУДМАН: Объясните подробнее, как это работает, поскольку агенты также приходили к вам очень обеспокоенными. Расскажите нам о том, что вы понимаете, шаг за шагом. Агент заходит в оружейный магазин и говорит владельцу оружейного магазина, что?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Это не в общем — я имею в виду, это было широко распространенное заблуждение относительно программы с первой минуты.Но что касается этого, наши расследования, не раскрывая каких-либо коммерческих секретов, позволяют нам отслеживать людей, которым не следует покупать огнестрельное оружие или покупать его по неправильным причинам. Как правило, обычно мы оперативно перехватываем это огнестрельное оружие или тех людей. Когда возможно, мы выясняем вероятную причину и производим аресты и преследуем их в судебном порядке. Когда мы не можем привлечь их к ответственности, мы явно перехватываем оружие и проводим расследование. В этом случае агентам было приказано позволить орудиям продолжать движение, минимальное наблюдение, а не отслеживать их до конечного пункта назначения, что было невозможно, потому что мы скрывали информацию от наших коллег в Мексике.

Так что любое предположение о том, что мы намеревались отследить их до их конечного пункта назначения и нацелить на этих крупных членов картеля, смехотворно. Этого не могло произойти, потому что в ту минуту, когда он подошел бы к границе, любое из орудий достигло бы границы, мы потеряли контакт, потому что у нас не было никаких договоренностей, и мы скрывали эту информацию от мексиканского правительства. . Таким образом, мы позволили этим орудиям двигаться, продолжать движение в надежде установить какую-то цепь или этот железный трубопровод, что было так далеко от истины, но мы никогда не смогли бы реализовать его.Младший агент, только что вышедший из академии, смог бы это сделать. Таким образом, единственный способ отследить эти ружья — это найти их на местах преступления или трупах.

ЭМИ ГУДМАН: Я имею в виду, как сообщала New York Times , один соломенный покупатель, посредник, купил 600 единиц оружия.

ВИНСЕНТ ЧЕФАЛУ: Это возмутительно. Проработав торговлю огнестрельным оружием на протяжении всей моей карьеры и будучи исключительно направленными на борьбу с насильственными преступлениями, мы никогда — мы, коллективно, как поле, как связанная с миссией организация, с надлежащим руководством — никогда не позволим такому количеству огнестрельного оружия получить вне нашего контроля, прежде чем вмешаться на каком-то уровне.

ЭМИ ГУДМАН: Мы говорим с Винсентом Чефалу. Он специальный агент Бюро по алкоголю, табаку, огнестрельному оружию и взрывчатым веществам, выступал против методов ATF, включая эту скандальную программу Fast and Furious. Итак, посмотрим. Если коротко, то за 16 месяцев вас пять раз переводили, трижды ругали, два раза отстраняли. Вы сейчас работаете из дома. Вам платят — сколько вам платят в год, чтобы оставаться дома и ничего не делать?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Где-то около 150 000 долларов.

ЭМИ ГУДМАН: И все же вы продолжаете говорить. Вы только что говорили о трупах. Поговорим о Брайане Терри, агенте пограничного патруля, убитом в декабре в Аризоне. Расскажи о том, что с ним случилось, Винсент.

ВИНСЕНТ ЧЕФАЛУ: У нас была мантра с тех пор, как я работал в ATF, которая приближается к 25 годам, но на протяжении всего нашего основания. Мы крайне серьезно относимся к попаданию огнестрельного оружия в руки преступников. И была мантра, что мы никогда не позволим ружью уйти, никогда не позволим ему потерять наш контроль, если у нас есть возможность остановить его, по самой причине, единственной цели, потому что мы не хотим брать на себя ответственность Сотрудник правоохранительных органов, в частности, погиб от одного из автоматов, которого мы могли остановить.И именно это делает смерть Брайана Терри — и, возможно, Хайме Сапаты — такой трагичной, потому что один из нас понес величайшую жертву, которую, по крайней мере, с нашей стороны, можно было предотвратить. Вы никогда не помешаете преступникам получить оружие, но в этом случае мы особенно помогли плохим парням. И, к сожалению, семья Терри принесла высшую жертву. И мне очень жаль, что мы не смогли сделать большего.

ЭМИ ГУДМАН: Оружие операции «Форсаж» найдено на месте преступления.

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Верно.

ЭМИ ГУДМАН: И Запалло sic ? Кто был он?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Сапата, Хайме Сапата —

ЭМИ ГУДМАН: Сапата.

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: — был агентом ICE в Мексике, который недавно был убит в какой-то засаде, и я предполагаю, что есть некоторая информация или свидетельство на каком-то уровне, что некоторое огнестрельное оружие могло быть связано с «Форсажем». .Но независимо от того, были они или нет, насилие — оно иллюстрирует насилие, которое мы должны оказывать, вы знаете, по обе стороны границы. Мы взяли на себя обязательство перед мексиканским народом внести свой вклад, и мы сделали прямо противоположное.

ЭМИ ГУДМАН: Винсент Чефалу, я хотела поговорить об адвокате из Аризоны, США, Деннисе Бёрке, который был отстранен от участия в этой программе, в операции «Форсаж», о значении этого, а также о том факте, что ключевые три агентов фактически повысили, поскольку глава Бюро по алкоголю, табаку и огнестрельному оружию был вынужден уйти.И они были руководителями, сильно критиковали себя.

ВИНСЕНТ ЧЕФАЛУ: Ох, это действие, само по себе, когда архитекторы «Форсажа» были перемещены и защищены на их нынешних должностях в ожидании расследования Конгресса США и Управления генерального инспектора Департамента Справедливость — это просто возмутительно. Это то же самое. И, честно говоря, именно такие решения привели к тому, что г-на Мелсона отозвали обратно в Министерство юстиции и поместили на другую должность.Ясно, что до тех пор, пока… эти… Билл Ньюэлл, Джордж Джиллетт и агент Вот, эти супервайзеры, о которых вы говорите, не имеют права на надлежащую правовую процедуру, как и все остальные. Но, учитывая имеющиеся доказательства и выдвинутые ими обвинения, очевидно, что они не должны занимать руководящие должности. Ясно, что налогоплательщикам не следовало оплачивать эти дорогостоящие шаги назад в Вашингтон, чтобы можно было защитить свои позиции, их зарплаты и льготы, и, надеюсь, вывести их из поля зрения общественности, где нет ответственности.Вы видели свидетельство перед Конгрессом. Ясно, что эти люди — ясно, что Билл МакМахон не должен отвечать за наши внутренние дела, который является прямым проводником Управления генерального инспектора —

ЭМИ ГУДМАН: Итак, люди —

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: — для этого расследования.

ЭМИ ГУДМАН: Ключевые руководители — я читаю из Los Angeles Times — Уильям МакМахон, заместитель директора АТФ по операциям на Западе, где была сосредоточена программа незаконного оборота, Уильям Ньюэлл и Дэвид Вот , оба полевых супервайзера, которые наблюдали за программой из офиса агентства в Фениксе, теперь их повысили и повысили в должности.

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Ну, технически говоря, и ответственный помощник специального агента Джордж Джиллетт, который также участвовал в этой операции, все они были перемещены, в большинстве случаев сбоку. Так что технически повышения в названии нет. Однако все они сохраняют свою зарплату высшему руководству. Они — получили статус лидера, а не понизили в должности и не подотчетны.

И снова мы просто заплатили — налогоплательщиками были «мы» — за то, чтобы переместить их в безопасную зону в штаб-квартире, где они могли бы, вы знаете, отвлечь от них всеобщее внимание, когда в будущем могут возникнуть судебные преследования.Итак, почему мы заплатили полмиллиона долларов, чтобы перевезти их до завершения расследования? Почему они вообще участвуют в проверке информации, которая будет передана в OIG? Как может Билл МакМахон, как заместитель помощника директора по всей этой программе, после того, как дал показания этого ужасного свидетельства, быть прямым контактом с Управлением генерального инспектора, которое расследует его? Я не знаю, как это сработает.

ЭМИ ГУДМАН: Теперь республиканские законодатели заявляют, что, по их мнению, Министерство юстиции сдерживает документы и препятствует их попыткам узнать больше об операции «Форсаж».Как ты думаешь, Винсент Чефалу?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: О, я думаю, это абсолютно правильно. Я думаю, что депутаты-демократы в комитете так же разочарованы. Они это выразили. Член рейтинга Каммингс тоже разочарован. Так и должно быть. Я сам, пытаясь защитить свой собственный спор, ввел FOIA в мои собственные записи о переводах, в результате чего печально известный председатель Исса закрасил и отредактировал страницу моего собственного перевода. Это не прозрачность, и это не соответствует директивам президента о прозрачности.Надеюсь, это изменится, потому что в конце концов мы действительно работаем для американского народа. Мы делаем — мы приносили присягу Конституции, а не Эрику Холдеру, не президенту Обаме, не председателю Иссе и никому другому. Мы подотчетны вам, американскому народу, и вы имеете право знать, что мы делаем с вашими деньгами и вашими ресурсами.

ЭМИ ГУДМАН: Итак, для ясности, глава Бюро по алкоголю, табаку и огнестрельному оружию Мелсон был назначен на другой пост.Берк, поверенный США в Аризоне, подал в отставку. Это правильно?

ВИНСЕНТ ЦЕФАЛУ: Верно. Я видел заявление об увольнении. Кеннет Мелсон был переведен на политическую должность в главном суде. Итак, это правильно, да.

ЭМИ ГУДМАН: Я хотела закончить комментарием президента Мексики Фелипе Кальдерона, который неоднократно призывал США ввести более строгие законы об огнестрельном оружии. Он обвиняет американцев, цитирую, в «безответственности» в отношении продажи оружия.Это комментарий, который он сделал в прошлом году.

ПРЕЗИДЕНТ ФЕЛИПЕ КАЛДЕРОН: [переведено] Американцы начали продавать оружие как ненасытная и амбициозная отрасль, как американская оружейная промышленность. Это часто провоцирует конфликты в бедных и менее развитых странах, таких как Африка, из-за продажи оружия, находится в ситуации, очень похожей на ту, в которой живет мексиканский народ. Для торговцев оружием это бизнес по продаже оружия преступникам, и нам необходимо мобилизовать не только общественное мнение против этого, но и объединиться с международным общественным мнением, чтобы продемонстрировать безответственность американцев, насколько бы это им не мешало или мешало их политическим действиям. кампании.

ЭМИ ГУДМАН: Президент Мексики Фелипе Кальдерон в прошлом году. Ваш ответ, Винсент Чефалу, специальный агент BATF?

ВИНСЕНТ ЧЕФАЛУ: Что ж, при всем уважении к Президенту, он имеет право на свое мнение и свою оценку. Я имею в виду, они — из-за наших рук, из-за бесхозяйственности нашего агентства, они сильно пострадали в Мексике. Но чем больше законов — у нас были законы. Мы не применяли их. Билл Ньюэлл и наше руководство не перехватывали эти 2000 единиц оружия.Если бы мы, у нас не было бы этих разговоров прямо сейчас. Меня бы здесь сегодня утром не было, и в нашем агентстве не было бы беспорядка. Итак, вы можете записать в книгу тысячу законов. Это не значит, что нельзя улучшить и ужесточить законы или наказания. Это работа Конгресса; это не моя работа. Мы должны быть аполитичными. У нас нет позиции. Вы даете нам законы, мы будем обеспечивать их в меру своих возможностей.

Но в данном случае мы просто не выполнили свою работу. Это был полный проступок по всем направлениям, и никто не решил подойти и что-нибудь предпринять.У нас есть топ-менеджеры, которые говорят, что знали об этом. Они ставили под сомнение это на частных брифингах, на встречах. Мне кажется, заместитель помощника директора Стив Мартин сказал, что во время интервью с комитетами г-на Иссы он спросил: «Как долго мы собираемся позволять этому продолжаться? Когда мы это остановим? » Он был обязан доложить. Он был обязан использовать свой авторитет и свое положение, чтобы остановить это. Но это не способствует развитию карьеры, поэтому нужно прекратить всю эту «продолжай ладить», из-за которой наше Бюро рухнуло.Люди должны начать делать свою работу, и нам нужно подотчетное руководство.

ЭМИ ГУДМАН: Винсент Чефалу, я хочу поблагодарить вас за то, что вы были с нами, специальный агент Бюро по алкоголю, табаку, огнестрельному оружию и взрывчатым веществам, высказался против практики ATF, включая скандальную программу Fast and Furious, и в результате, если можно так сказать, выгнали на пастбище. Он все еще работает на BATF, дома, и ему нечего делать. Теперь генеральный прокурор Эрик Холдер объявил об отставке прокурора Соединенных Штатов в Фениксе Денниса Берка и переназначении исполняющего обязанности главы Бюро по алкоголю, табаку, огнестрельному оружию и взрывчатым веществам Кеннета Мелсона.Это демократия сейчас! , Democranow.org, Отчет о войне и мире . Винсент Чефалу говорит с нами из Рино, штат Невада.

Leidos Holdings, inc (LDOS) Q2 2021 Расшифровка телефонного разговора о прибылях и убытках

Источник изображения: Пестрый дурак.

Leidos Holdings, inc (NYSE: LDOS)
Телефонный звонок о доходах за 2 квартал 2021 г.
3 августа 2021 г., 8:00 утра по восточному времени

Содержание:

• Подготовленные примечания
• Вопросы и ответы
• Обзвон участников

Подготовлено примечаний:

Оператор

Приветствую и добро пожаловать на телеконференцию Leidos за 2 квартал 2021 года.В настоящее время все участники находятся в режиме только прослушивания. После официальной презентации состоится сессия вопросов и ответов. [Инструкции оператора] Напоминаем, что эта конференция записывается.

Теперь я хотел бы передать конференцию вашему хозяину, г-ну Стюарту Дэвису, старшему вице-президенту по связям с инвесторами. Пожалуйста продолжай.

Стюарт Дэвис — Старший вице-президент по связям с инвесторами

Спасибо, Гектор, и доброе утро всем.Я хотел бы приветствовать вас на нашей телефонной конференции, посвященной финансовой отчетности за второй квартал 2021 года. Сегодня ко мне присоединяется Роджер Кроун, наш председатель и главный исполнительный директор; и Крис Кейдж, наш финансовый директор. Сегодняшняя телеконференция транслируется в разделе «Связи с инвесторами» нашего веб-сайта, где вы также найдете отчет о прибылях и убытках и слайды презентации, которые мы будем использовать во время сегодняшней телеконференции.

Переход к слайду 2 презентации. Сегодняшнее обсуждение содержит прогнозные заявления, основанные на окружающей среде, какой мы ее сейчас видим, и как таковая включает риски и неопределенности.Пожалуйста, обратитесь к нашему пресс-релизу для получения дополнительной информации о конкретных факторах риска, которые могут привести к тому, что фактические результаты могут существенно отличаться. Наконец, как показано на слайде 3, во время телеконференции мы обсудим финансовые показатели GAAP и non-GAAP. Их согласование включено в сегодняшний пресс-релиз и слайды презентации.

На этом я передам звонок Роджеру Крону, который начнет со слайда 4.

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Спасибо, Стюарт, и спасибо всем за то, что присоединились к нам. Утро для нашей телефонной конференции по прибыли за второй квартал 2021 года.

Наши результаты во втором квартале отражают нашу позицию лидера на рынке государственных технологий. Я чрезвычайно горжусь тем, как Leidos отреагировал на пандемию, поскольку наши сотрудники и деловые партнеры постоянно оказывали помощь нашим клиентам и акционерам. Несмотря на то, что мы по-прежнему бдительны в связи с недавним ростом числа случаев COVID-19, Leidos сильнее, чем когда-либо, с новыми квартальными рекордными уровнями выручки и невыполненных заказов, что соответствует нашему лидирующему в отрасли органическому росту. Когда я смотрю на квартал, выделяются четыре сообщения.Во-первых, наши сильные финансовые результаты показывают, что наша стратегия работает. Во-вторых, импульс развития нашего бизнеса закладывает основу для будущего роста. В-третьих, мы эффективно размещаем капитал, чтобы расширить наши предложения на привлекательных рынках. В-четвертых, мы создаем заинтересованный и эффективный персонал.

Теперь я подробнее остановлюсь на каждом из этих четырех ключевых сообщений. Во-первых, наши сильные финансовые показатели были отмечены двузначным органическим ростом и скорректированной маржой EBITDA, превышающей нашу долгосрочную цель.Выручка за квартал составила 3,45 миллиарда долларов, что на 18% больше по сравнению с предыдущим годом в целом и на 16% в органическом выражении. Рентабельность по скорректированному показателю EBITDA в размере 10,4% соответствовала прогнозу и выше долгосрочного целевого показателя, установленного нами два года назад. После корректировки на единовременный прирост во втором квартале 2020 года разводненная прибыль на акцию без учета GAAP выросла на 37%. Эти результаты произошли не просто так, они являются прямым результатом нашей стратегии. Мы дифференцировались на рынке за счет масштабов, что создает более конкурентоспособную структуру затрат и расширяет возможности для получения доли и положения на жизненно важных рынках.Мы также использовали нашу структуру затрат для инвестиций в ключевые технологии, что еще больше отличает нас от конкурентов.

Номер два, наш двигатель развития бизнеса продолжил динамику, которая движет нашим лидером в отрасли органическим ростом. В этом квартале мы достигли чистых бронирований в размере 3,8 млрд долларов, что соответствует соотношению балансовых счетов к счетам 1,1. Наш четырнадцатый квартал подряд с соотношением балансовых счетов к счетам, равным единице или выше. Наше промежуточное соотношение балансовой и балансовой отчетности за 12 месяцев составляет 1,2. В результате общий объем невыполненных заказов на конец квартала составил рекордные 3 миллиарда долларов, что на 9% больше по сравнению с аналогичным периодом прошлого года.

В нашем сегменте здравоохранения мы заключили новый контракт с фиксированной ценой с максимальной стоимостью почти 1 миллиард долларов на улучшение здоровья военнослужащих до, во время и после развертывания. В рамках этого контракта, известного как Программа готовности к резервному здоровью, или RHRP. Мы проведем обследование физического, психического и стоматологического здоровья, а также лабораторные и диагностические услуги при поддержке безопасной ИТ-инфраструктуры и центра обслуживания клиентов. Более миллиона человек резервных компонентов Америки готовы поддерживать и защищать нашу нацию, когда это потребуется.Для нас большая честь поддерживать их.

В нашем сегменте оборонных решений Управление транспортной безопасности заключило с нами основной контракт на сумму 470 миллионов долларов на интеграцию оборудования для досмотра транспортных средств в аэропортах по всей стране. В соответствии с нашей политикой мы выполнили только небольшой заказ на начальное задание в этом квартале, хотя рассчитываем достичь полной стоимости в течение срока действия контракта. Эта работа — реконфигурация работы, которую мы выполняем более 12 лет. И мы также обслуживаем оборудование для досмотра TSA на всех U.S. федерализованные аэропорты, помогающие TSA обеспечивать свободу передвижения людей и коммерции как один из основных способов, которыми Leidos делает мир более безопасным, здоровым и эффективным.

В нашем гражданском сегменте Федеральное управление гражданской авиации уведомило нас о том, что они дали нам начальные задания в рамках долгосрочного расширения для непрерывной поддержки интеграции систем и улучшения модернизации системы маршрутной автоматизации или системы ERAM. Система ERAM имеет решающее значение для работы в национальной аэрокосмической системе и в 20 центрах управления воздушным движением в континентальной части США.S. Мы не забронировали номер, близкий к потолочной стоимости в $ 6,8 млрд, но это говорит об уверенности, которую FAA имеет в Лейдосе. Мы ожидаем, что правительственный финансовый год в 2022 году начнется с постоянной резолюции, но клиенты по-прежнему смогут финансировать работу в областях, где есть критические потребности. Наш позитивный прогноз подкрепляется активностью предложений. В конце квартала у нас было 49 миллиардов долларов неоплаченных заявок, из которых 35 миллиардов долларов — новая работа для нас.

Номер три, мы вкладываем капитал, чтобы завершить наши предложения на привлекательных рынках, чтобы стимулировать прибыльный рост.В мае мы завершили сделку по приобретению компании Gibbs & Cox, которая принесла нам проектирование и инжиниринг военно-морской архитектуры мирового класса. Они составляют 68% нынешнего боевого надводного флота ВМФ и являются поистине национальным достоянием. Эта сделка улучшает восприятие нас во флоте и открывает для нас значительные рыночные возможности. В процессе стратегического планирования мы определили морской рынок как привлекательный рынок, на который мы не попали.

Для обеспечения синергии, особенно в отношении беспилотных наземных и подземных систем, Gibbs & Cox будет объединена с подразделением Leidos Maritime Systems и будет работать под управлением Dynetics в сегменте оборонных решений.Кроме того, мы видим раннюю прибыль от приобретения Группы 1901 года, которое мы закрыли в январе этого года. В прямом смысле, 1901 оказывает существенную поддержку переходу и операциям программы NGEN. Они значительно расширили свой штат, расширив текущий центр корпоративных ИТ-операций в Вирджинии и ускорив создание новых офисов службы поддержки NGEN в Сан-Диего, Норфук и Бойсе. Платформа 1901, предоставляющая ИТ-услуги, сделала их лучшим выбором для требований программы в этой области.

1901 также сыграл важную роль в обеспечении 125-миллионного последующего контракта с Бюро алкоголя, табака, огнестрельного оружия и взрывчатых веществ на управляемые ИТ-услуги. Прочные отношения 1901 года с ATF в сочетании с их эффективной моделью предоставления услуг сделали их ключевыми в стратегиях предложения и исполнения. Помимо использования капитала для предотвращения роста, мы также стремились вернуть капитал акционерам. С этой целью наш Совет только что одобрил увеличение квартальных дивидендов на 6%.Это увеличение отражает уверенность Совета директоров и руководства в качестве нашей прибыли и нашей способности генерировать денежные средства.

Номер четыре; это бизнес, связанный с людьми, и этот квартал стал еще одним доказательством того, что мы являемся предпочтительным работодателем, который может привлечь рабочую силу, необходимую для выполнения наших финансовых обязательств. В течение квартала мы наняли более 4500 человек, а к концу квартала у нас было более 42000 человек. Наша численность персонала увеличивалась на 6% последовательно и на 11% в годовом исчислении.Наша способность привлекать лучшие таланты таким образом важна, поскольку мы укомплектовываем персонал для успешного выполнения новых программ. Одна из причин, по которой мы привлекательны для соискателей, заключается в том, что мы инвестируем в управление талантами и развитие карьеры. Мы регулярно проверяем таланты и планируем действия по развитию, включая ротации на всех уровнях компании. Например, исполнительный вице-президент Джим Кантор недавно объявил о своем намерении уйти в отставку после выдающейся 31-летней карьеры в Leidos. Это позволило нам переконфигурировать нашу команду для оптимизации производительности с учетом нашего быстрого роста и изменения рыночных приоритетов.

Я попросил Вики Шманске, возглавляющую нашу группу разведки, взять на себя новую роль исполнительного вице-президента по корпоративным операциям. В своей новой роли Вики будет управлять производственной деятельностью и реализовывать стратегические функциональные инициативы. Рой Стивенс, который руководил развитием бизнеса и стратегией, сменил Вики на посту президента Intelligence Group. Кроме того, я попросил директора по кадрам Пола Анголу возглавить стратегические усилия, чтобы наметить наш путь вперед на космическом рынке национальной безопасности.Эти изменения помогут нам подготовиться к неопределенному будущему. Несколько недель назад мы начали розыгрыш $ 1 млн, чтобы побудить наших сотрудников пройти вакцинацию от COVID-19, и Хассон снова собирается вместе. В то время все наши учреждения были открыты, и все вакцинированные лица могли работать без маски.

За последние недели многое изменилось. Очень заразный дельта-вариант и тенденции распространения инфекции вызывают тревогу. Как и на протяжении всей пандемии, мы будем соблюдать все руководящие принципы CDC, и большинству наших учреждений потребуются маски независимо от статуса вакцинации.Хотя мы не ожидаем, что наши клиенты снова закроют свои офисы, мы не можем быть уверены в этом. Перед лицом этой неопределенности мы решили оставить в силе наши текущие рекомендации, и Крис расскажет вам об этом более подробно. Для меня часть возвращения к нормальной жизни — это возможность встретиться лицом к лицу с нашими инвесторами и аналитиками. Мы намерены провести День инвестора в Нью-Йорке 7 октября. У нас есть интересная история, и мы с нетерпением ждем ее.Мы будем внимательно следить за протоколами COVID из Нью-Йорка и сообщать вам, если наши планы изменятся.

Наконец, Фрэнк Кендалл ушел из нашего Совета и стал министром ВВС. Я хочу поблагодарить Фрэнка за его службу Лейдосу и, что более важно, ВВС, Министерству обороны и стране.

Теперь я передам вызов Крису Кейджу. Я рад, что Крис занял должность финансового директора и присоединился к нам на этих телеконференциях.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Спасибо, Роджер, и спасибо всем, кто присоединился к нам сегодня.Я проработал в Leidos 23 года и лично получил пользу от перспективных программ развития, на которые Роджер ссылался ранее. Мой предшественник и наставник, Джим Рейган, создал очень сильную команду по набору процессов и дисциплин, которые я имел возможность формировать за последние несколько лет. В дальнейшем я буду уделять первоочередное внимание трем направлениям: выполнение наших финансовых обязательств, интеграция приобретений и определение приоритетности инвестиций для реализации нашей стратегии.Итак, давайте сразу перейдем к результатам второго квартала 2021 финансового года.

Начиная с отчета о прибылях и убытках на слайде 5, я сначала рассмотрю финансовые результаты на корпоративном уровне, а затем перейду к уровню сегментов, чтобы рассмотреть основные факторы, влияющие на выручку и прибыльность. Как сказал Роджер, основным моментом этого квартала стал наш органический рост, который поистине беспрецедентен в нашей отрасли в наших масштабах. Выручка за квартал составила 3,45 миллиарда долларов, что на 18% больше, чем в предыдущем квартале.Без учета приобретенной выручки в размере 58 миллионов долларов выручка в органическом выражении выросла на 16%. Примечательно, что выручка выросла во всех трех отчетных сегментах. Органический рост несколько увеличился из-за падения доходов в прошлом году в результате пандемии, когда, например, наша компания по сдаче экзаменов на инвалидность была почти полностью остановлена. Даже если мы добавим 132 миллиона прямых последствий пандемии в предыдущем году, органический рост выручки все равно составил 11%.

Скорректированная EBITDA за второй квартал составила 359 миллионов, что на 5% больше, чем за аналогичный период прошлого года.Маржа по скорректированной EBITDA снизилась с 11,8% до 10,4% за тот же период. Без учета прибыли VirnetX по сравнению с предыдущим периодом, скорректированная маржа EBITDA увеличилась на 140 базисных пунктов за квартал. Это произошло в первую очередь из-за сильного управления программами, более высоких объемов по некоторым программам с фиксированными ценами и лучшего прямого использования рабочей силы. Чистая прибыль без учета GAAP составила 218 миллионов во втором квартале, что на 2% меньше, чем в прошлом году, а разводненная прибыль на акцию без учета GAAP за квартал составила $ 1,52, что также на 2% ниже по сравнению со вторым кварталом 2020 финансового года.Без учета дохода VirnetX от результатов прошлого года, разводненная прибыль на акцию без учета GAAP выросла на 37%. Наша эффективная ставка налога на прибыль без учета GAAP в этом квартале составила 24% по сравнению с 22%, которые мы ожидали на 2021 финансовый год, что негативно повлияло на разводненную прибыль на акцию без учета GAAP на 0,04 доллара США. Повышение налоговой ставки коснулось в основном нашего международного бизнеса. Самым большим фактором стало то, что во втором квартале мы полностью осознали влияние недавно принятого повышения ставки корпоративного налога в Великобритании с 19% до 25%.

Теперь для обзора результатов сегмента на слайде 6; Выручка от Defense Solutions выросла на 14% по сравнению с кварталом прошлого года.Исключая приобретения 1901 Group и Gibbs & Cox, органическая выручка выросла на 12%, в основном за счет увеличения числа недавних контрактов, таких как NGEN, и увеличения разработки систем вооружения в Dynetics. Выручка от гражданского строительства увеличилась на 5% по сравнению с кварталом предыдущего года, при этом примерно половина была получена за счет приобретения SD&A, а половина — за счет увеличения спроса на крупные программы, такие как интеграция сайтов в Хэнфорде. Доходы от здравоохранения увеличились на 62% по сравнению с кварталом предыдущего года, и весь этот рост был естественным.У нас был большой годовой рост по DHMSM, а также хороший рост по новой программе консультирования по вопросам военной и семейной жизни или MFLC. Однако наибольший рост наблюдался в сфере проведения экзаменов на инвалидность в нашей дочерней компании QTC. Помните, что этот бизнес больше всего пострадал от пандемии в квартале прошлого года, и теперь объемы выше, чем когда-либо, поскольку мы продолжаем работать с отставанием экзаменов.

Что касается рентабельности, то маржа операционной прибыли Defense Solutions без учета GAAP за квартал составила 8.3%, что на 20 базисных пунктов выше по сравнению с кварталом предыдущего года. Операционная маржа по гражданским не-GAAP снизилась с 12,9% в предыдущем квартале до 9,1%, поскольку у нас было меньше поставок наших систем безопасности на границе и в портах, а также систем досмотра в аэропортах.

Наконец, что наиболее важно, рентабельность операционной прибыли без учета GAAP в области здравоохранения за квартал выросла до 17,8% по сравнению с 5,3% в предыдущем квартале. Высокие показатели рентабельности в этом квартале улучшились за счет значительного увеличения объема выручки, но улучшение по сравнению с прошлым годом стало возможным благодаря стратегическим инвестициям, которые мы сделали год назад для того, чтобы наши сотрудники оставались на месте и были готовы удовлетворить растущий спрос со стороны клиентов.

Теперь обратимся к денежному потоку и балансу на слайде 7, операционный денежный поток за квартал составил 17 миллионов, а свободный денежный поток, за вычетом капитальных затрат, составил четыре миллиона. В течение второго квартала мы завершили программу монетизации дебиторской задолженности, что негативно отразилось на нашем операционном и свободном денежном потоке на 94 млн долларов США. С начала года до даты программа монетизации AR нейтральна для денежных потоков, и мы не планируем больше продавать дебиторскую задолженность. В течение квартала мы использовали оборотный капитал для финансирования запуска новых программ и расширения существующих программ, а также для обеспечения устойчивого органического роста.Наиболее отчетливо это влияние видно на просадке авансовых платежей по сравнению с прошлым годом.

Получение денежных средств от бизнес-сегментов соответствовало плану на первое полугодие и фактически превышало уровень прошлого года. Но эти показатели затмеваются единовременными неоперационными денежными выплатами в первой половине 2020 года. К ним относятся 225 миллионов от программы монетизации AR; 85 миллионов от VirnetX; 48 миллионов в рамках отсрочки по уплате налогов в соответствии с Законом CARES; и 103 миллиона в виде более низких налогов наличными, что является лишь вопросом времени.Во втором квартале мы выплатили 27 миллионов долгов и вернули акционерам 48 миллионов ежеквартальных дивидендов. Как указано в пятничном сообщении 8-K, наш совет директоров одобрил увеличение дивидендов на 6%, начиная с сентября. Это наш первый рост за два года, который отражает нашу уверенность в завтрашнем дне и приверженность доходам для акционеров. Кроме того, мы заплатили чистое вознаграждение в размере 376 миллионов за приобретение Gibbs & Cox, что позволяет нам предоставлять широкий набор инженерных решений для США.С. и международные военно-морские силы. В этом году Gibbs & Cox приносит чуть более 100 миллионов выручки с маржой, превышающей средний показатель по сегменту Defense Solutions, учитывая более высокую долю работ с фиксированной ценой.

Для финансирования сделки мы привлекли 380 миллионов кредитов сроком на один год на очень привлекательных условиях, не более LIBOR плюс 113 базисных пунктов. По состоянию на 2 июля 2021 года у нас было 338 миллионов денежных средств и их эквивалентов и 5,1 миллиарда долгов. В прошлом месяце мы запустили программу выпуска коммерческих бумаг для управления краткосрочной ликвидностью.Коммерческие векселя дадут нам большую гибкость при меньших затратах, чем продажа дебиторской задолженности. Коммерческие бумаги доступны нам только потому, что наш долг имеет инвестиционный уровень, и мы рассматриваем наш рейтинг инвестиционного уровня как стратегический актив. В оставшуюся часть года нашим основным приоритетом развертывания капитала будет погашение долга, поскольку мы вернемся к нормализованному коэффициенту левериджа, равному трехкратному. Мы по-прежнему привержены нашей долгосрочной сбалансированной стратегии развертывания капитала, которая заключается в надлежащем использовании рычагов и поддержании нашего рейтинга инвестиционного уровня, возвращении ежеквартальных дивидендов нашим акционерам, реинвестировании в целях роста, как органического, так и неорганического характера, и возврате избыточных денежных средств акционерам в виде налогово эффективный способ.

О перспективах. Как показано на слайде 8, мы сохраняем наш прогноз на 2021 финансовый год, включая выручку от 13,7 млн ​​до 14,1 млрд, скорректированную маржу EBITDA от 10,5% до 10,7%; разводненная прибыль на акцию без учета GAAP от 6,35 до 6,65 долларов; и операционный денежный поток на уровне 875 миллионов и более. В течение года мы, как правило, ужесточаем наши ориентировочные диапазоны, но есть много сил, в том числе ухудшение ситуации с COVID с более заразным вариантом Delta при стагнации показателей вакцинации, а также текущие проблемы в глобальной цепочке поставок, особенно вокруг компьютерных чипов.Выручка NGEN растет, но это все еще новый клиент и новый контракт. Поэтому мы не хотим иметь установленную историю потока заказов и не хотим забегать вперед. Принятие решений о награждении Intelligence Community заметно замедлилось, и мы также все более осторожны в отношении восстановления международного рынка досмотра в аэропортах. Таким образом, мы не прогнозируем возврата к росту до 2023 года.

Приобретение Gibbs & Cox должно удержать нас в пределах нашего диапазона доходов, но, вероятно, не выйдет выше этого диапазона.Мы ожидаем, что во втором полугодии выручка будет расти линейно по сравнению с уровнями второго квартала. Движущие силы роста в третьем и четвертом кварталах включают полный вклад Gibbs & Cox, продолжающийся рост NGEN, MFC и ряд других программ. Мы ожидаем, что к концу года медицинские осмотры VA вернутся к уровню, предшествующему пандемии. Что касается рентабельности EBITDA, то показатели с начала года до даты во втором квартале составили 11,1%, что соответствует прогнозному диапазону на год, скорректированная рентабельность EBITDA во втором полугодии будет примерно на том же уровне, что и в этом квартале.Разводненная прибыль на акцию не по GAAP, как правило, будет соответствовать выручке и марже. Однако в настоящее время мы прогнозируем, что налоговая ставка на 2021 финансовый год составит от 23% до 23,5% вместо нашего первоначального прогноза в 22%, что немного перевешивает рост от Gibbs & Cox. В дополнение к международным налоговым ветрам, о которых я упоминал ранее, мы теперь прогнозируем более низкий вычет для компенсации, основанной на акциях, на основе динамики курса акций в течение первой половины года.

Наконец, мы ожидаем, что денежный поток будет следовать нашей обычной схеме и ускориться во второй половине года, чтобы достичь ориентированного уровня.За последние пять лет мы генерировали в среднем 65% годового операционного денежного потока в третьем и четвертом кварталах. Эта модель будет несколько более выражена в этом году благодаря оборотному капиталу, который мы направили в первой половине этого года для обеспечения роста на 17% по сравнению с аналогичным периодом прошлого года. У нас есть подробный план выполнения для достижения нашего прогнозного операционного денежного потока.

И после этого я передам звонок Гектору, чтобы мы могли ответить на несколько вопросов.

Вопросы и ответы:

Оператор

Спасибо.[Инструкции оператора] Ваш первый вопрос исходит от линии Шейлы Каяглу и Джеффрис. Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Шейла Кахьяоглу — Jefferies LLC — Аналитик

Привет, доброе утро, Роджер. И добро пожаловать, Крис. Спасибо вам обоим. Так что, может быть, Роджер, не могли бы вы прокомментировать свой бизнес с Intel, насколько он велик? И вы упомянули о некоторых задержках, Booz, я думаю, за квартал упал на среднюю однозначную цифру. Так, может быть, что конкретно происходит с клиентом Intel и какие задержки вы наблюдаете?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Ну, это немного больше двух миллиардов.И, конечно же, это наш сегмент оборонных решений, поэтому мы не особо выделяем его. Хорошая новость для нас заключается в том, что после квартала мы действительно выиграли повторную ставку, которая составляет менее миллиарда. Но в целом мы увидели, что им просто потребовалось больше времени, чтобы пройти процесс приобретения, а награды, рекомендации, новый бизнес, который мы включили в наш план, заняли буквально месяцы или кварталы, чтобы воплотить их в жизнь. И что это значило для нас и для других в отрасли, вместо того, чтобы заказывать полную добавочную стоимость, мы получаем более короткие пролонгации.И поэтому на самом деле это не способствует увеличению отставания. Но за последние два квартала мы действительно не потеряли значительного объема бизнеса. Это было похоже на многое в COVID, только что все двигалось вправо.

Шейла Кахьяоглу — Jefferies LLC — Аналитик

Хорошо, а затем, может быть, один быстрый анализ прибылей. Вы, ребята, действительно хорошо справились с рентабельностью в первом полугодии, которая выросла на 11% — извините, рентабельность по EBITDA составила 11%, а ваш предполагаемый прогноз составляет 10%.Это похоже на начало консерватизма Криса, или это, возможно, в основном из-за влияния гражданской маржи, потому что это выглядело так, как будто в этом квартале она упала, и я думаю, вы упомянули из-за бизнеса безопасности.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Шейла, это Крис. Спасибо. И здесь нет никакого образца консерватизма, но мы изложили несколько причин для осторожности, верно. Итак, есть некоторые неизвестные. В прошлом году с COVID ситуация немного изменилась.Так что с вариантом «Дельта» мы здесь консервативны. Мы планировали для Civil, конечно, мы ожидаем некоторого увеличения сверхурочной работы от бизнеса продуктов безопасности, и не только со стороны авиации, но и с портами и границами, которые этот бизнес очень хорошо показал нам на основе наследия. Итак, есть несколько вариантов. Мы по-прежнему намерены увеличить объем инвестиций в исследования и разработки. Мы включили это в наш план на весь год, поэтому некоторые из них запланированы на последнюю половину года, но мы хотим быть уверены, что сможем выполнить эти обязательства.

Шейла Кахьяоглу — Jefferies LLC — Аналитик

Спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Роберта Спингарна из Credit Suisse. Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Роберт Спингарн — Credit Suisse AG — Аналитик

Итак, Роджер, может быть, Крис, вы уже пару раз говорили о своем внимании к руководящим принципам выручки, но есть несколько движений. куски.И мне было интересно, можем ли мы измерить некоторые из них. Было бы правильно охарактеризовать бизнес военно-морской архитектуры, я не знаю, 80 миллионов долларов, 90 миллионов долларов в квартал.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Нет. Мы бы сказали, может быть, 100 миллионов долларов на половину. Так что помните, это то, что мы получаем. Так что это примерно полгода, назовем это, 100 миллионов долларов, может быть, немного лучше, чем 100 миллионов долларов, и эта сумма растет. Но на половину, которую мы забронируем, округлили до 100 миллионов долларов.

Роберт Спингарн — Credit Suisse AG — Аналитик

Хорошо. И это то, что вы думаете с точки зрения возможной компенсации негативных последствий COVID? Я знаю, что COVID — это сложная дискуссия для начала. Но как ты об этом думаешь? Может быть, еще один способ спросить, Роджер, изменились ли ваши цели органического роста по трем сегментам с первого квартала?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Ну, вы знаете, мы говорим 139.

Роберт Спингарн — Credit Suisse AG — Аналитик

Я говорю не только об этом.

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Да. Я имею в виду не заметно — эй, Робин, ты и я думаю, что другие дежурные знают, где мы были год назад, и мы думали, что сделали разумные изменения год назад. И мы как бы вошли во вторую волну. И я думаю, мы все поняли, что COVID непредсказуем.Добавьте к этому нехватку компьютерных микросхем, и мы обычно получаем много материалов во второй половине. И хотя мы наблюдаем некоторое удлинение цепочки поставок, мы пока не видим дефицита. Но вы все преподали нам отличный урок за последние 12 месяцев. И мне вроде как нравится то, где мы находимся. Да, Gibbs & Cox немного подбадривает нас. Но в следующие шесть месяцев существует масса неопределенности.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Да, Робин, это Крис.Просто чтобы добавить к этому. Очевидно, что мы ежеквартально составляем подробные прогнозы и обзоры операций по всем направлениям нашей деятельности, и всегда есть движения, верно, по всему портфелю. Роджер только что говорил о задержках Intel. Так что, возможно, это была сфера бизнеса, в которой некоторые вещи, которые мы внедряем в конвейер, еще не вышли. Мы надеялись, что некоторые из них дадут и потенциально принесут некоторый подъем. Ни один из них не был потерян. Но в портфеле всегда есть небольшие движения в пределах 13 долларов.9 миллиардов средней точки, к которой мы стремимся, поэтому статья Гиббса и Кокса потенциально помогает частично компенсировать это или дает нам некоторую возможность для снижения риска с учетом ситуации с COVID.

Роберт Спингарн — Credit Suisse AG — Аналитик

Хорошо. Я думаю, что я действительно ищу, так это потому, что прошлый год был таким сложным, а в этом году вы многое наверстаете, и у вас много хороших предприятий, которые растут. Я имею в виду, что это, очевидно, год высоких темпов роста.Как мы уже говорили, вы являетесь лучшим производителем в отрасли. Может быть, высокий уровень, Роджер, заглядывая в будущее, когда все нормализуется, как вы видите модели роста в бизнесе?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Что ж, мы по-прежнему наблюдаем сильный рост, но не на том уровне, который мы только что продемонстрировали. На нашей встрече с инвесторами два года назад мы говорили о пяти, верно. И мы поговорим об этом еще раз в октябре.Итак, ясно, что нас устраивает пять. Но то, что мы делали в течение последних двух кварталов, действительно беспрецедентно, и я не ожидаю нарисовать еще один квартал, как мы. Часть этого, безусловно, в годовом исчислении — это восстановление COVID, но мы получили значительное количество побед и высокий процент наших конкурентов, поэтому мы по-прежнему очень оптимистичны в отношении наших долгосрочных перспектив роста, но не на двузначных цифрах. уровень.

Роберт Спингарн — Credit Suisse AG — Аналитик

Хорошо.Спасибо большое.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит из линии Кая фон Румора и Коуэна. Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Cai von Rumohr — Cowen and Company, LLC — Аналитик

Да. Потрясающий. Итак, Роджер, вы выиграли AEGIS, но против него протестуют. Может быть, расскажи нам об этом. И что касается ваших более крупных невыполненных предложений, я считаю, что они включают в себя текущую, UDS Recompete и премию FAA на сумму 3,5 миллиарда долларов.

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Хорошо, Кай, спасибо и привет, доброе утро.Итак, мы выиграли — это предложение НАСА — порядка 2,5 миллиардов долларов. Это было опротестовано действующим президентом, поскольку кажется, что все в настоящее время, НАСА принимает меры по исправлению положения. И поэтому довольно сложно предсказать, каков будет результат. История говорит нам, что НАСА предпринимает корректирующие действия, принимает еще одно решение о награждении, а затем, конечно, обычно следует еще один протест, который, как правило, длится около 100 дней. И поэтому им может потребоваться еще три-четыре недели, чтобы внести коррективы, а затем вы прибавите еще три месяца после этого.Таким образом, мы подозреваем, что, к сожалению, мы будем говорить о возрасте НАСА до третьего и четвертого кварталов. Что касается DAS, это большой контракт с DISA. Мы надеемся, что это будет награда за четвертый квартал. Он мог легко соскользнуть в первую четверть. И я подозреваю, Цай, что против этого будут возражать так или иначе. Заявка UDS, которая находится на NGA, номинально составляет от четырех до пяти миллиардов, очень большая заявка, мы ожидали, что она выйдет в июле и августе. Есть еще кое-что, что происходит в NGA, которая входит в группу Intel, вопрос Шейлы, из-за чего это может быть отложено.Это могло случиться в августе, могло случиться в сентябре.

Честно говоря, отдел закупок в NGA очень занят. И когда они доберутся до получения награды, они сделают ее. Мы думаем, что это третий квартал, но прогнозировать такие вещи становится все труднее. Но это самые большие из них. Есть и другие вещи, которые упали на уровень в один миллиард.

Cai von Rumohr — Cowen and Company, LLC — Аналитик

Отлично, спасибо.А потом, если бы я мог ответить на вопрос Шейлы о марже. Это звучало так, будто вы изо всех сил старались напомнить людям, что ваша долгосрочная цель — 10%, а не 10,4%. Я предполагаю, что, когда мы просто посмотрим на следующий год, я бы предположил, что маржа здоровья должна быть ниже, потому что у вас нет наверстывания VA. Если у вас есть AEGIS, это ниже среднего, поэтому я предполагаю, что гражданские компании также будут иметь понижательное давление из года в год. Так что вызов 10% просто из консервативности или есть реальная озабоченность, что на самом деле нет возможности 10.5% — это все, что вы могли бы сделать на устойчивой основе.

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Давай, Крис.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Мне очень жаль, Роджер. Итак, Кай, Крис, я просто собирался вмешаться в это. Итак, во-первых, мы еще пытались подать сигнал о 2022 году, верно. Об этом мы и расскажем, когда подойдем к Дню инвестора в октябре. Но есть еще кое-что, что вы указали, и это различные заслуживающие внимания наблюдения.Во-первых, Роджер говорил о 1901 году, о вкладе, который вносит в наше портфолио. И это действительно стало бы инструментом не только для защиты в корпоративных ИТ, но и для гражданского сегмента, чтобы помочь нам реализовать эти возможности более рентабельно и стимулировать рост маржи. Так что мы видим в этом то, что нам в этом поможет. Очевидно, что в гражданском сегменте маржа будет расти с восстановлением нашего бизнеса продуктов безопасности, и не только в области авиации, но, как я уже упоминал, портов и границ, и есть возможности, будь то в рамках счета за инфраструктуру или иным образом с нашими клиентов по всему миру для того направления бизнеса, в котором мы настроены оптимистично.

Итак, эти вещи помогут нам поднять маржу в этой области, и мы должны быть готовы к тому, что показатели здоровья немного уменьшатся по мере того, как число невыполненных экзаменов сокращается. Но опять же, это по-прежнему будет надежной частью портфеля по рентабельности. Так что в октябре будет больше, но я не думаю, что вам стоит читать о том, что мы сбрасываемся на 10% в долгосрочной перспективе.

Cai von Rumohr — Cowen and Company, LLC — Аналитик

Большое спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит из линии Гэвина Парсонса и Goldman Sachs.Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Гэвин Парсонс — Goldman Sachs — Аналитик

Привет, доброе утро. Роджер, я просто хотел уточнить ваш комментарий по органическому росту в ответ на вопрос Роба. Вы сказали на последнем Дне инвестора, вы говорили о 5%, вас это устраивает. Не опережая цели Дня инвестора, можете ли вы просто уточнить, имеете ли вы в виду, что думаете, что можете продолжить рост на 5% в многолетней перспективе?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Я хочу внести ясность.Долгосрочный прогноз — это то, что мы представили на конференции инвесторов, черт возьми, в мае два года назад, и мы повысили его с трех до пяти, хорошо. Мы ничего не сделали, чтобы это изменить, хорошо. И это то, что я просто пытался сформулировать Робу. При этом наш органический рост, честно говоря, наш общий рост был действительно замечательным. И наш счет к счету был просто великолепен. Я имею в виду, что команда проделала огромную работу. До октября обновлять 5% не собираюсь. Но я попытался объяснить причины, по которым должна быть большая уверенность в пяти или, возможно, выше.Итак, Гэвин, это все, что я могу.

Гэвин Парсонс — Goldman Sachs — Аналитик

Хорошо. Нет, это здорово. Я ценю разъяснения. Я просто хотел прояснить это. А потом, Крис, все, что вы можете сделать, чтобы помочь нам количественно оценить вклад медицинских экзаменов, который на 30% превышает уровень 2019 года, но, очевидно, у вас есть и другие драйверы роста. Есть ли какое-нибудь представление о том, что, возможно, выросло в этом бизнесе по сравнению с 2019 годом, не считая скучных экзаменов?

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Да.Гэвин, я имею в виду, как вы понимаете, есть некоторая чувствительность к тому, чтобы слишком далеко зайти в портфель на конкурентной или иной основе. Но это не единственное, что происходит со здоровьем. Это то, о чем мы хотели сказать. Мы давно говорили вам, что программа DHMSM будет набирать обороты. Эта команда работает исключительно хорошо. MFLC действительно находится на хорошей траектории для наращивания, и изначально эта маржа будет ниже, чем у других частей портфеля, но у них будет возможность увеличить сверхурочные.И у нас нет вклада RHRP в эти цифры, верно. Так что это будет то, чего мы с нетерпением ждем в следующем году, чтобы по-настоящему активизироваться по мере реализации этой программы. Таким образом, экзаменационный бизнес превосходит исторический уровень, но, честно говоря, эта команда работала так хорошо, что заказчик хочет отправить нам больше работы сверхурочно. И поэтому мы готовы удовлетворить их потребности, насколько это возможно. И поэтому есть надежда, что мы сможем продолжить это в хорошем ролике.

Гэвин Парсонс — Goldman Sachs — Аналитик

Спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от Мэтта Эйкерса из Wells Fargo. Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Мэтью Акерс — Wells Fargo Securities — Аналитик

Привет, доброе утро, ребята, спасибо за вопрос. Не могли бы вы как бы обновить, что вы думаете о законопроекте об инфраструктуре, возможно, в тех областях, где вы могли бы увидеть в этом выгоду?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Отличный вопрос.Конечно, мы надеемся, что будет редкое двухпартийное шоу, которое выглядит так, как будто оно на 550 миллиардов долларов больше того, что мы видели бы. Кроме того, большое внимание уделяется вашим дорогам, общественному транспорту и водным системам. Но мы думаем о широкополосном доступе, аэропортах, портах, водных путях, оборудовании безопасности. Кроме того, мы думаем, что особое внимание будет уделяться защите инфраструктуры, будь то кибербезопасность или усиление защиты сети. Это прямо на нашем пути, и мы действительно рады 5G и, честно говоря, 5G действительно для всех в стране.И мы думаем, что это станет стимулом для еще одного крупного инвестирования в ИТ и ИТ-технологии, поскольку позволит всем нам работать с периферийного устройства. Телефоны, которые у нас есть сегодня, — это только начало. Когда у всех нас будет 5G, функциональность, которую вы будете носить в кармане, возрастет на порядок. И что с облаком и как услугой, мы могли видеть, что это стимулирует совершенно новый раунд инвестиций и приложений, миграцию, поэтому мы настроены оптимистично.

Теперь, я предупреждаю всех, это наше типичное федеральное правительство, уполномоченное соответствующим образом, затем оно распространяется среди агентств.Они составляют планы, затем размещают запросы предложений, у них есть отраслевые дни, и мы делаем ставки. И я не хочу звучать здесь слишком негативно, но требуется много времени, чтобы такие деньги текли через систему туда, где мы заключаем контракты, начинаем работать, превращаем их в доход, а затем, наконец, в деньги и прибыль. Итак, все это положительно, и это положительно для нас, не только из-за нашей гражданской группы, но и в целом, и всего, что мы делаем в области технологий, это произойдет через несколько месяцев или лет, но в целом положительно.

Мэтью Акерс — Wells Fargo Securities — Аналитик

Спасибо, и я думаю, что в отношении COVID в этой последней волне, похоже, это серьезный драйвер консервативного прогноза на оставшуюся часть года. Видите ли вы какие-либо признаки из определенных областей, что, возможно, клиенты рассматривают возможность повторного закрытия точек или задержку контрактов или что-то еще, что вы там видите, или это просто осторожно в руководстве?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Мы не видели клиентов, как когда мы говорили о 360 и Законе CARES, и Intel перешла на сменную работу.Я скажу только то, что мы все знаем, я имею в виду, что президент приходит по национальному телевидению и говорит о мандате в маске, мы все встаем и слушаем. По сути, мы возвращаемся к мандату маски в соответствии с руководящими принципами CDC, и мы ожидаем, что все наши клиенты сделают это. Нас больше беспокоит то, что происходит за пределами США. Как вы знаете, у нас есть важные операции в Австралии, Великобритании и на Ближнем Востоке. И они снова сидят на корточках. В Австралии не только трудно попасть в страну, но и сложно объехать всю страну из Мельбурна, Канберры и Сиднея.И я думаю, что Крис справился с этим хорошо, но наш бизнес SD&A и, конечно же, часть, которую мы приобрели, сильно зависят от международного бизнеса, который зависит от тарифов на авиабилеты, а когда объемы падают, денег нет.

И хотя мы не проиграли ни одного значительного соревнования в бизнесе SD&A, мы видели многие, многие отмененные и отложенные. Поэтому я думаю, что влияние на нас будет в нашем гражданском сегменте бизнеса, который мы называем обнаружением безопасности и автоматизацией.

Мэтью Акерс — Wells Fargo Securities — Аналитик

Понятно, спасибо.

Оператор

Следующий вопрос исходит из линии Питера Армента и Бэрда. Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Эрик Руден — Роберт В. Бэрд и Ко — Аналитик

Привет, доброе утро. Сегодня у вас на связи Эрик Руден на линии для Питера. Может быть, просто для меня. Сегодня во многих отраслях большое внимание уделяется росту затрат на производство и трудозатрат, которые составляют вашу львиную долю.Вы видите здесь какое-то давление, я знаю, что вы упомянули о 4500 новых сотрудниках. Итак, есть ли какие-то признаки того, как вы компенсируете эти встречные ветры в нынешних условиях, и сколько дополнительных сотрудников потребуется в ближайшем будущем?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Давайте посмотрим. Это своего рода смешанный ответ. Мы называем их единорогами. Так что кто-то, у кого есть образ жизни на полиграфе, допущен к системе безопасности и может программировать на компьютерном языке под названием Python в столичном регионе округа Д.C. Да, мы наблюдаем большую конкуренцию за этого человека. И чтобы получить персонал, который нам нужен, мы должны конкурировать, и это стимулирует рост рабочей силы в этих областях. В других областях доступно много людей. Мы смогли достичь поставленных целей по найму. И, конечно же, как мы сказали во время этого звонка, у нас есть стратегия, позволяющая переместить нашу работу в столичный регион и переехать в районы страны, где рабочая сила более доступна. Наше приобретение 1901 года, о котором, как я знаю, мы мало говорили, имеет значительное присутствие в Блэксбурге и отличные отношения с Virginia Tech.И это была еще одна причина, по которой он был нам привлекателен, и это открывает для нас новую рабочую силу. У нас есть центр разработки программного обеспечения в Моргантауне при университете Западной Вирджинии. У нас есть один в Чарльзвилле в UVA, и теперь у нас есть один в Блэксбурге.

В целом, мы ожидаем нанять, может быть, число от 9000 до 10 000 новых, и мы находимся на уровне, я думаю, что я сказал 4500. Сейчас мы немного лучше, благодаря укомплектованию штатом Navy NextGen, который продолжает работать очень и очень хорошо.И нам понравилось то, что мы называем захватом действующего предприятия, когда люди, работающие по контракту с предыдущим подрядчиком, решили прийти на работу в Leidos. Таким образом, мы на самом деле значительно выше этого числа. Итак, мы идем по пути к достижению наших целей по найму, но всегда есть этот конкретный человек, у вас есть докторская степень и радиолог, которого трудно найти, особенно если вы географически ограничены, как вы часто занимаетесь бизнесом Intel.

Эрик Руден — Роберт В. Бэрд и Ко.- Аналитик

Хорошо, спасибо, это очень помогло. Это было для меня.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит от линии Тоби Соммера из Truist Securities. Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Tobey Sommer — Truist Securities, Inc. — Аналитик

Я надеялся, что вы могли бы рассказать о том, как вы ожидаете инфляцию заработной платы, если она как бы материализуется и окажет большое влияние на бизнес, и когда вы описали свой ответ, могли бы вы касаетесь различных типов контрактов в той степени, в которой это может быть информативным?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Да.Тоби, я начну, и Крис может прийти с некоторыми числами. У нас есть портфель, который немного — почти 50/50. Это немного отличается от фиксированной цены. И некоторые из наших работ по фиксированной цене — это то, что мы называем временем и материалами, но думаем, что это фиксированная ставка, верно. Так много в час, и клиент покупает несколько часов. А еще у нас есть так называемые контракты с возмещением затрат или контракты на основе затрат. И я позволю себе начать очень просто, а затем посмотрю, смогу ли я ответить на ваш вопрос.Очевидно, что в отношении работы, подлежащей возмещению, при инфляции заработной платы это, по сути, становится переносом на клиента. И это не так — может быть, не так позитивно, как кажется, потому что клиенты живут на годовой бюджет. И если вы являетесь клиентом НАСА, у вас есть X для программы в данном году, у вас нет X плюс инфляция. И поэтому, если наша заработная плата увеличивается в течение бюджетного года, клиенту часто приходится сокращать объем работ, потому что у него нет дополнительных средств для выполнения программы.И затем, конечно, по фиксированной цене, как мы сказали, мы выполним программу или выполним задачу за фиксированную сумму в долларах. И поэтому положитесь на нас, чтобы сбалансировать стоимость часа с количеством часов.

И наша задача, и я думаю, что она будет проблемой для всей отрасли, если мы увидим значительный рост заработной платы выше того, что мы оцениваем, когда мы делаем ставки, тогда нам придется найти новые способы повышения эффективности обслуживания и доставки, чтобы компенсировать эту инфляцию. . Мы всегда пытаемся это сделать. Вот почему иногда по программам с фиксированной ценой наша прибыль может быть немного лучше.И нам просто нужно сделать больше этого. Отчасти, возвращаясь к нашему комментарию 1901 года, ажиотаж вокруг 1901 года заключается в том, что он имеет платформу как услугу, которая действительно не зависит от рабочей силы, поэтому мы берем такую ​​высокую плату за услугу и используем в основном прикладную ИТ-платформу. доставить это. И у нас есть много возможностей для повышения эффективности с помощью модели обслуживания и доставки.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

И Тоби, это Крис.Чтобы добавить к мысли Роджера, вы затронули большинство проблем здесь. Каждый год мы проводим детальное наращивание цен на многолетние цены для наших косвенных и прямых затрат на рабочую силу и, конечно же, предполагаем некоторый уровень инфляции, поскольку мы строим на его основе многолетние прогнозы. Если выяснится, что инфляция заработной платы опережает наши оценки, у нас есть возможность обновить это, что мы и сделаем, и мы накроем эти расходы. Итак, вы действительно справедливы — в любой момент времени вы может выиграть несколько контрактов, по которым вы оцениваете их по старым ставкам.Что касается Роджера, вы должны найти возможности для повышения эффективности для защиты прибыли. Но в будущих предложениях мы устанавливаем цены, которые, по нашему мнению, потребуются для выполнения работы. Таким образом, мы очень прозрачны в отношении наших клиентов. И у нас есть хорошая конкурентоспособная Intel в тех областях, где, как мы думаем, нам нужно быть по цене, чтобы победить. Таким образом, все эти факторы влияют на то, как мы выполняем, как мы выигрываем работу и как мы поддерживаем профиль маржи, который мы передаем вам.

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Да.Тоби, еще одна сторона. Просто потому, что я думаю, что это действительно наводящий на размышления вопрос. Одна из вещей, которые мы наблюдали, заключается в том, что по мере того, как мы добавляем в эту смесь большее количество сотрудников колледжей и менее опытных сотрудников, то, что мы называем категориями труда и их коэффициентом совершения, они зарабатывают меньше. И мы были в восторге от качества наших менее опытных сотрудников и их способности выполнять свою работу. И это еще один рычаг для нас, поскольку мы увеличиваем набор сотрудников в колледж, чтобы использовать больше сотрудников, получивших высшее образование, на ключевых должностях.

Тоби Соммер — Truist Securities, Inc. — Аналитик

Большое спасибо. И я хотел узнать ваше мнение о продолжающемся разрешении проблем и какие данные вы можете ожидать, что они распространятся на данном этапе?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Да. Я буду очень быстро. Мы хотим задать еще один или два вопроса. Я думаю, что все ожидают увидеть их в конце финансового года.Я не оптимистичен, я не думаю, что правительство отключит нас. Думаю, мы преодолеем лимит долга. Не знаю, есть ли у людей по обе стороны прохода аппетит к этому. Я хотел бы быть оптимистом и сказать, что мы получим счет до конца года, но я нет. Я думаю, что в первом квартале мы проведем CR до конца. Таков был мой прогноз всего, что, кажется, происходит. И мы все знаем, что работа по контракту будет продолжена, а новые запуски будут отложены.Кстати, новые запуски все равно откладываются. И, как мы уже говорили много-много раз, я думаю, что в 19 из последних 20 лет у нас был CR. Так что я не вижу в этом большого влияния на наш бизнес. Я хотел бы увидеть счет, но мы определенно можем обработать CR, если он не пройдет за первый квартал.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Спасибо, Тоби.

Тоби Соммер — Truist Securities, Inc.- Аналитик

Спасибо.

Оператор

Ваш следующий вопрос исходит из линии Джозефа ДеНарди и Стифеля. Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Джозеф ДеНарди — Stifel, Nicolaus & Company — Аналитик

Может быть, Роджер или Крис, просто ответив на предыдущий вопрос, корпоративные ИТ были в центре внимания для всех вас и, очевидно, имели большой успех там с NGEN и теперь AEGIS. Я не могу себе представить, чтобы это было так сосредоточено, если бы эта работа была минимальной.Так есть ли эмпирическое правило, скажем, для 10-летнего контракта, когда эта работа становится все более активной? Это сразу? Это займет несколько лет? Неужели не до конца контракта? Как это вообще работает?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Вы имеете в виду увеличение нашей средней маржи или увеличение прибыли на акцию?

Джозеф ДеНарди — Stifel, Nicolaus & Company — Аналитик

С учетом вашей средней маржи.

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Да. Нет правила. И действительно, это заказчик за покупателем, а конкуренция за конкурентом. У нас есть некоторые программы, которые начинаются, и они превышают нашу маржу. У нас есть и другие программы, HRP, которая на самом деле не является ИТ-программой, но в RHRP встроен шестимесячный переход на очень низкий уровень. Таким образом, мы не увидим, что RHRP приведет к значительному увеличению маржи только в следующем году только из-за способ структурирования контракта.Так что не существует особого практического правила. Но в прошлом мы обобщали этот призыв: у нас уходит некоторое время после того, как мы укомплектуем персонал и продемонстрируем эффективность, чтобы быть уверенными и, следовательно, повысить нашу ставку начисления. Но я передам это Крису.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Нет, Джо, обычно я бы сказал, мы вроде как даем нам от 1,5 до двух лет. Это зависит. Что нам в целом нравится в этих контрактах, так это то, что они часто бывают — будь то фиксированная ставка за единицу или фиксированная цена, и мы действительно думаем, что, поскольку мы лучше понимаем окружающую среду, есть возможности повысить эффективность среды и таким образом добиться экономии за счет автоматизации, через как услугу и так далее.Как указал Роджер, благодаря перебалансировке рабочей силы вы потенциально можете получить доступ к сотрудникам более низкого уровня. Итак, все немного разные. Это зависит от того, есть ли переходная фаза, как это было предложение, за что вам платят, так что на самом деле контракт за контрактом.

Джозеф ДеНарди — Stifel, Nicolaus & Company — Аналитик

Понятно, это полезно. А потом, Роджер, вы сказали ранее, что не обязательно ожидать роста на 10% каждый год, и это понятно.Мне просто любопытно, видите ли вы это, потому что вы просто пытаетесь управлять ожиданиями, что, очевидно, справедливо, или вы не видите возможностей с точки зрения захвата доли рынка в течение следующих двух лет, которые, возможно, были у вас несколько лет назад?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Да. Джо, это действительно скорее первое. Не называя слишком много цифр, мы намерены в этом году подать в совокупности больше предложений, чем в прошлом году, хорошо.И мы посмотрим на нашу воронку продаж, и у нас есть достаточно хорошо дисциплинированный процесс развития бизнеса, когда мы выходим на первые пять-десять лет, мы выстраиваем воронку потенциального бизнеса. Мы не ограничены возможностями. Фактически, то, что мы пытаемся сделать, — это пораньше отозвать из нашего конвейера те вещи, которые не находятся, если хотите, не в нашей зоне поражения. Таким образом, мы более эффективно расходуем фонды нашего нового бизнеса, но в этом году мы подадим больше предложений, чем в прошлом году. И ясно, что в прошлом году мы сделали больше, чем годом ранее; так что это действительно не возможность.Черт возьми, мне бы хотелось думать, что мы могли бы вырасти на 10% вечно, если бы мы были своего рода высокотехнологичным стартапом из Кремниевой долины. И это просто — нам очень, очень повезло, и мы не хотим заходить слишком далеко на лыжах.

Джозеф ДеНарди — Stifel, Nicolaus & Company — Аналитик

Спасибо.

Оператор

Наш последний вопрос сегодня исходит от Марианы Перес Мора из Bank of America. Пожалуйста, продолжайте свой вопрос.

Мариана Перес Мора — Bank of America Securities — Аналитик

Доброе утро всем, спасибо. В своем обновленном обзоре вы упомянули проблемы, связанные с цепочкой поставок, и особенно с удлинением и цепочкой поставок компьютерных микросхем. Не могли бы вы рассказать нам и немного рассказать о воздействии на данный момент и как мы должны думать о потенциальном воздействии в будущем?

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Думаю, я понял ваш вопрос.Позвольте мне попробовать.

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

И действуйте на данный момент для решения основных задач.

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Да, мы мало что видели. Мы, наверное, видели — и мы устанавливаем много оборудования для конечных пользователей в рамках нескольких наших программ. И поэтому мы покупаем у всех известных вам домочадцев. И то, что мы говорим о кремниевых пластинах, которые затем преобразуются в процессоры, как процессоры общего назначения, так и интегральные схемы для конкретных приложений.То, что мы думали, было связано с COVID, и мы как бы поместили это в большую категорию, поскольку мы вроде как начали выходить из COVID, мы обнаружили, что части цепочки поставок отключены на этом рынке компьютерных микросхем более низкого уровня, и это не так. возвращаюсь так быстро, как все думали. И на самом деле, на некоторых рынках, таких как автомобили, их опасения, некоторые — определенно на уровне пластин, — что некоторые из этих мощностей вообще не вернутся. Недостатков мы не видели. Мы только что наблюдали задержки.

И мы планируем через пару лет.Но мы наблюдаем удлинение, особенно для ИТ-оборудования, в некоторых областях, вероятно, от нескольких недель до месяца, и материалы влияют на наши доходы, как хорошие, когда это происходит, так и плохие, когда они задерживаются. И это часть того, почему мы не касаемся руководства за последние шесть месяцев. Хотя сейчас у нас все хорошо, по некоторым из наших контрактов на последнюю половину года запланированы значительные закупки материалов. И из-за большой осторожности мы хотели сделать вашу цепочку поставок наглядной и прозрачной.

Кристофер Кейдж — Главный финансовый директор

И я думаю, Мариана, это определенно то, на что мы будем уделять больше времени при разработке нашего плана на 2022 год, потому что, как указал Роджер, у нас есть отношения, ключевые отношения с критически важными поставщиков, и мы всегда в курсе того, что там происходит. Но несмотря на то, что ИТ-компонент многих контрактов не всегда приносит нам наибольшую прибыль. Это действительно способствует доходу. И поэтому он довольно цельный.Итак, по мере того, как мы приступаем к планированию на 2022 год, убедитесь, что у нас есть хорошее представление о последних ожиданиях. Но в этом году с указанным нами ориентировочным диапазоном мы думаем, что дали себе некоторую свободу действий в отношении некоторых потенциальных задержек, умеренных задержек по всей цепочке поставок.

Роджер Крон — Председатель и главный исполнительный директор

Спасибо.

Оператор

Дамы и господа, мы подошли к концу сессии вопросов и ответов.И я хотел бы снова обратиться к г-ну Стюарту Дэвису, чтобы он выступил с заключительным словом.

Стюарт Дэвис — Старший вице-президент по связям с инвесторами

Спасибо, Гектор, за помощь в утреннем звонке. И спасибо всем, кто присоединился к нам сегодня утром, и за ваш интерес к Лейдосу. Мы с нетерпением ждем новых новостей в ближайшее время, особенно в октябре.

Оператор

[Заключительное слово оператора]

Продолжительность: 65 минут

Участники звонка:

Стюарт Дэвис — Старший вице-президент по связям с инвесторами

Роджер Председатель и главный исполнительный директор

Кристофер Кейдж — Финансовый директор

Шейла Кахьяоглу — Jefferies LLC — Аналитик

Роберт Спингарн — Аналитик Credit Suisse AG —

Cai von Rumohr — Cowen and Company, LLC — Аналитик

Гэвин Парсонс — Goldman Sachs — Аналитик

Мэтью Акерс — Аналитик Wells Fargo Securities

Эрик Руден — Роберт У.Baird & Co. — Аналитик

Тоби Соммер — Truist Securities, Inc. — Аналитик

Джозеф ДеНарди — Stifel, Nicolaus & Company — Аналитик

Мариана Перес Мора — Bank of America Securities — Аналитик

Подробнее Анализ LDOS

Все расшифровки телефонных звонков

Эта статья представляет собой мнение автора, который может не согласиться с «официальной» рекомендательной позицией премиальной консультационной службы Motley Fool.Мы разношерстные! Ставка под сомнение по поводу инвестиционного тезиса — даже нашего собственного — помогает нам всем критически относиться к инвестированию и принимать решения, которые помогают нам стать умнее, счастливее и богаче.

Высокопроизводительный фиксатор голеностопа Mueller ATF (средний левый)

：	全新: Совершенно новый, неиспользованный, неоткрытый, неповрежденный предмет (включая предметы ручной работы). Посмотреть продавца листинг для получения полной информации….		全新
Марка:	Мюллер	Модель:	Все виды спорта
Главное предложение:	Сжатие, стабилизация	Площадь тела:	Лодыжка
Тип:	Скоба	Функции:	Регулируемый, со шнурками
Отделение:	Унисекс	Страна / регион производства:	Соединенные Штаты
Размер:	M	Цвет:	белый
Пользовательский пакет:	Нет

Лот из 5 Звездных войн 442-й батальон клон-солдат 3.75-дюймовые наклейки на фигурку Blue Rider 1/48 АВСТРО ВЕНГРИЯ ВВС Первой мировой войны СЕРИЙНЫЕ НОМЕРА The Separate Rose Ketologic Keto Coffee Creamer Mocha Flavour 13,7 унции 30 порций Exp 9/2020 856923007431 Hot Wheels Roll Cage Свободный Совершенно новый картридж с мини-тюнером Audiovox XM CNP2000 для XM Radio 44476034213 Kaws Holiday-Kokeshi Doll Set-Wood Edition 1000 CK BE от Calvin Klein Eau De Toilette Spray (унисекс) 6,6 унций (для женщин) Спутниковое радио Sirius PNP 3 Audiovox модель 144-2453 Отличная замена приемника Masken Mundschutz Community Masken Stoffmasken Tropic Body Wash Trio / Gift Pack BNIB BT Decor 2600 Advanced Call Blocker Проводной телефон — Белый — Новый продавец в Великобритании Roberts Revival iStream3 Smart Bluetooth DAB / DAB + / FM Radio Midnight Blue Vanity Fair Women’s My Favorite Pants Illumination, Mercury Print, Size 10.0 Wrl Max Factory Figma berserk Griffith Juicy Couture Размер 6.5 M EYLSSA Electric Blue Suede Heels Туфли-лодочки Новая женская обувь 742498107464 Кабинетные собачьи пинетки Размер 57x80x60 см Умные цифровые весы для ванной, беспроводной Bluetooth BMI, Вес тела, Жир, Черный Фотостудия Bechinger, Берлин- Шёнеберг, Портрет маленького ребенка в таблетках для подавления аппетита Sommerli AppiSlim для похудания (женщины и мужчины) — Натуральные …

Высокоэффективная скоба для лодыжки Mueller ATF (средняя левая)

Высокоэффективная скоба для лодыжки Mueller ATF (средняя левая)

Здоровье и красота МУНДП

Электрооборудование и принадлежности 1шт НОВЫЙ суперконденсатор 2.Конденсатор 7V100F Фарадный конденсатор 2.7V 100F ATF Электронные компоненты и полупроводники

Электрическое оборудование и принадлежности 1шт НОВИНКА Суперконденсатор 2.7V100F конденсатор Фарадный конденсатор 2.7V 100F ATF Электронные компоненты и полупроводники

• Дом
• Бизнес, офис и промышленность
• Электрооборудование и принадлежности
• Электронные компоненты и полупроводники
• Платы и прототипирование
• Другие печатные платы и прототипирование
• 1 шт. НОВЫЙ суперконденсатор 2.Конденсатор 7V100F Фарадный конденсатор 2.7V 100F ATF

конденсатор 2.7V100F конденсатор Фарадный конденсатор 2.7V 100F ATF 1Pcs NEW Super, Эквивалентное последовательное сопротивление DC (мОм): 11, Максимальный ток: 60A, 1 x 2,7V 100F суперконденсатор фарад », Емкость: 100F, Класс конденсатора: алюминий электролитический конденсатор, Структура конденсатора: конденсатор постоянной емкости, Гарантия качества, ограничение по времени 50% скидка, Удовлетворение гарантировано, все по самым низким ценам, гарантировано! Суперконденсатор 2.7V100F конденсатор Фарадный конденсатор 2.7V 100F ATF 1шт NEW, 1шт NEW Суперконденсатор 2.7V100F конденсатор Фарадный конденсатор 2.7V 100F ATF.

: 11, емкость: 100F, неиспользованный, конденсатор 7V100F, конденсатор 2 фарад. 1шт НОВЫЙ суперконденсатор 2, эквивалентное последовательное сопротивление постоянного тока, может поставляться в нестандартной упаковке. Класс конденсатора: алюминиевый электролитический конденсатор, См. Все определения условий: Торговая марка: Unbranded / Generic. Конденсатор суперфарад 7В, 100Ф, мОм, Состояние :: Новое: Совершенно новый, нераспечатанный и неповрежденный товар в оригинальной розничной упаковке.Модель:: Емкость Фарах: Тип:: Емкость. 7V 100F ATF, 1 x 2, Конструкция конденсатора: конденсатор постоянной емкости, Если элемент поступает напрямую от производителя, EAN:: Не применяется: MPN:: Не применяется, например, обычная или без печати коробка или пластиковый пакет, Производитель: : Не применяется: UPC:: не применяется. Максимальный ток: 60А, подробную информацию см. В списке продавца.

1 шт. Новый суперконденсатор 2.7V100F конденсатор Фарадный конденсатор 2.7V 100F ATF

1шт НОВЫЙ суперконденсатор 2.Конденсатор 7V100F Фарадный конденсатор 2.7V 100F ATF

slnrc.org Эквивалентное последовательное сопротивление постоянному току (мОм): 11, Максимальный ток: 60A, 1 x 2,7V 100F суперфарадный конденсатор », Емкость: 100F, Класс конденсатора: алюминиевый электролитический конденсатор, Конструкция конденсатора: фиксированный конденсатор, Гарантия качества , ограничение по времени 50% скидка, удовлетворение гарантировано, все по самым низким ценам, гарантировано! .